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第九章 分子杂交技术Hybridization technique 概念： 在DNA与DNA，DNA与RNA之间，存在 着碱基互补的关系，在加热或加入变性剂等条件下，DNA双链之间的氢键被破坏，双链解开成为单链，此时加入有互补序列的DNA或RNA，在一定离子强度和温度下保温，则加入的DNA或RNA可与模板链形成稳定的DNA-DNA或DNA-RNA异源双链，此过程称为杂交。 主 要 内 容 核酸杂交的基本理论 核酸探针 核酸分子杂交方法 蛋白质分子杂交 第一节 核酸杂交的基本理论—DNA的变性与复性 DNA变性 方法 热变性：90~100℃ 酸碱变性：常采用碱变性 化学试剂变性：尿素、甲酰胺、甲醛等 特点：粘度增加、密度增加、增色效应、熔解温度(melting temperature,Tm) DNA复性或杂交(hybridization) ——DNA/DNA,DNA/RNA,RNA/RNA等 核酸分子杂交的原理 一、探针的分类 DNA探针 cDNA探针 RNA探针 寡核苷酸探针 切口平移法(nick translation) 随机引物法 聚合酶链式反应法 T4多核苷酸激酶标记DNA5’末端 DNA快速末端标记 化学标记技术:直接与核酸进行化学反应而连接在核酸上 T4多核苷酸激酶标记DNA5’末端