第7章亲和层析.pptVIP

第七章 亲和层析 技术背景 一般纯化蛋白质、核酸等大分子物质的方法的主要依据是，各种大分子之间理化特性的差异性。 如果这种差异性较小，要得到一种纯度稍高的物质，常常需要进行多次繁琐的操作，耗费较长的时间，但最终收得率却是很低。 内容提要 第一节 基本原理 第二节 操作 第三节 提高吸附剂的操作容量 第四节 应用实例 第一节 基本原理 亲和层析的概念 亲和力 根据生物体中高分子化合物能与之相对应的专一分子特异识别和可逆结合的特征,将生物分子间的这种结合能力称为亲和力. 亲和层析法 利用生物大分子和固定相表面存在某种特异性吸附而进行选择性分离的一种生物大分子分离的层析方法。 亲和层析法的实质 是在载体(无机或有机填料)的表面先键和一种具有一般反应性能的间隔臂,随后再连接配体（酶、抗原、激素等）组成固定相,而固载的配体高选择地吸附与其有生物特性的大分子而被保留,非特异的分子不被保留先流出层析柱,保留在柱上的分子将以纯品形态洗脱下来。 亲和层析具备的三要素 介质(基质)—具有活化基团 间隔臂— 连接介质与配体的分子 配体— 具有识别能力 反配体（分离物）— 与配体进行可逆结合 亲和层析的特点： 条件温和:不影响样品的生物活性,适合生物大分子的操作。 纯化效率高:一步法分离和纯化混合物中的样品,提纯达几千倍,得到高纯度样品。 选择性强:依据生物学特异性,而非物理