血清二氧化碳酶试剂法测定法.doc

血清二氧化碳酶试剂法测定法 1. 实验原理 PEPC＋Mg2+使用磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC) PEPC＋Mg2+ 磷酸烯醇丙酮酸+ HCO3- 草酰乙酸 + H2PO4- MDH草酰乙酸 + NADH类似物 + H+ 苹果酸 + NAD+类似物 MDH 上述反应会破坏下列平衡： CO2 + H2O H2CO3 H+ + HCO3- 促使CO2向HCO3-的转换，由此可以检测出血清或血浆中总CO2的浓度。 在405nm或415nm波长处检测吸光度的下降，反映还原型的辅因子NADH类似物的减少，和样品中的总二氧化碳浓度呈比例。 2. 标本： 2.1 病人准备：无特殊。 2.2 类型：血清、肝素血浆。 3. 标本存放：应尽快分离血清或血浆，并保存于2～8℃。不可将标本暴露于空气。分离的样品需密闭保存，防止二氧化碳的损失，并在收集后的最短时间内完成检测。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：超时送检的、细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂 奥林巴斯CO2测定试剂盒（货号：1 0950 99 10 试剂6×100ml） 6.1.1 试剂组成 试剂（R）： 缓冲液 pH 7.5 磷酸烯醇丙酮酸(PEP) 12.5mmol/L 磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC) 400U/L 苹果酸脱氢酶(MDH) 4100U/L NADH类似物 0.6mmol/L 活化剂、稳定剂、表面活性剂、防腐剂 适量 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。开盖后放于仪器的冰箱中可以稳定30天。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.5注意事项：应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品：建议使用DiaSys公司提供的TruCal Bicarbonate标准品对自动分析仪进行校准。校准稳定期：10天。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 6.3 质控品：每批样品检测时，建议使用DiaSys公司提供的TruLab Bicarbonate控制品进行内部质量控制。具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控（DR006162）做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal Bicarbonate标准品碳酸氢盐浓度校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。 12. 参考值范围 [1]：成年人：22～29mmol/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义[1,2]：二氧化碳检测用于血液酸-碱平衡的诊断。检测值的升高和降低表明代谢和呼吸系统酸-碱平衡失调。 14. 操作性能 14.1 线性范围：4～50mmol/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 批内精密度 n=20 (mmol/L) s (mmol/L) CV (%) 样品1 20.8 0.31 1.48 样品2 27.5 0.43 1.56 样品3 45.5 0.53 1.16 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试剂盒(x)，同时对92个样品进行CO2检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下： y=0.96x+0.56 mmol/L；r=0.984。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为1mmol/L。 14.5 病人结果可报告范围：4～50 mmol/L 15. 超出范围结果处理：本法对二氧化碳的检测范围为4～50 mmol/L。当样品测定值超过上限时，应将样品用9 g/L氯化钠溶液作1+ 1稀释后，重新测定，结果乘以2。 16. 病危报警值的处理 1