血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定.doc

血清天门冬氨酸氨基转移酶IFCC推荐方法测定 1. 实验原理：国际临床化学学会(IFCC)推荐的紫外连续监测法。 L-天门冬氨酸+ ?-酮戊二酸 AST 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+ NADH +H+ MDH苹果酸脱氢酶 L-苹果酸+NAD++H2O 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA血浆。 3. 标本存放：3天内的活性损失：2～8℃保存：8%；15～25℃保存：10%；标本稳定性：-20℃保存至少可稳定3个月。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂：奥林巴斯AST测定试剂盒 试剂1：；试剂2： 6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存 试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用奥林巴斯公司提供的校准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。 7. 仪器：奥林巴斯AU2700生化分析仪 8. 操作步骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪项目测定参数.SOP文件 8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU2700生化分析仪操作规程.SOP文件 9. 检验结果的判断与分析 10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。 11. 计算方法：以TruCal U复合校准品AST校准值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行AST活力检测，可以直接使用ΔA/min均值乘以计算因子得到结果，但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算ALT活力的计算因子见下表： ΔA/min×因子 = AST活力[U/L] 底物起始的反应（37℃） 样品起始的反应（37℃） 340 nm 2143 1745 334 nm 2184 1780 365 nm 3971 3235 12. 参考值范围 [4] 不含磷酸吡哆醛 含磷酸吡哆醛 女性 31U/L 10～35U/L 男性 37U/L 10～50U/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 13. 临床意义[1,2] 丙氨酸氨基转移酶（ALT）旧称谷丙转氨酶（GPT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST）旧称谷草转氨酶（GOT）。它们是氨基转移酶类的典型代表。氨基转移酶催化氨基从氨基酸转移给?-酮酸的反应。 ALT是肝脏的特异性酶，仅在肝胆疾病时显著升高。而AST水平的升高和心肌或骨骼肌损伤，以及肝组织损害等都有关。因此同时进行ALT和AST的检测用于鉴别肝损伤和心肌或骨骼肌损伤。AST/ALT比率可用于肝病的鉴别诊断。比率1预示中度的肝损伤；比率1和严重肝病有关，常见慢性肝病。 14. 操作性能 14.1 线性范围2-800U/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU2700批内精密度小于3%，总精密度小于3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。 不含磷酸吡哆醛 批内精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 天间精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 样品1 25.1 0.82 3.25 样品1 25.7 1.13 4.40 样品2 51.3 1.57 3.06 样品2 48.6 0.67 1.38 样品3 116 0.90 0.77 样品3 115 0.80 0.69 含磷酸吡哆醛 批内精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 天间精密度 n=20 (U/L) s (U/L) CV (%) 样品1 43.6 1.10 2.51 样品1 44.0 1.59 3.61 样品2 74.5 1.79 2.41 样品2 77.0 3.05 3