《dna重组技术应用基本工具》讲义新人教版选修.pptVIP

1.1 DNA重组技术的基本工具 专题1 基因工程 1.2 基因工程的基本操作程序 1.3 基因工程的应用 1.4 蛋白质工程的崛起 1.1 DNA重组技术的基本工具 基因工程的概念 基因工程： 又叫基因拼接技术或DNA重组技术，是按照人们的意愿，进行严格的设计，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传技术。（赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品） 基因工程的概念 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的基因产物 抗虫害的玉米 转鱼抗寒基因的番茄 转基因鲑鱼 基因工程产品 转黄瓜抗青枯病基因的甜椒 乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷) 基础理论和技术的发展催生了基因工程 DNA是遗传物质的证明 DNA双螺旋结构和中心法则的确立 遗传密码的破译 基因转移载体的发现 工具酶的发明 DNA合成和测序技术的发明 DNA体外重组的实现 重组DNA表达实验的成功 第一例转基因动物问世 PCR技术的发明 基础理论 技术发明 DNA重组技术的基本工具 限制性核酸内切酶——“分子手术刀” DNA连接酶——“分子缝合针” 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车” 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 分布：主要在原核生物中 作用特点：特异性。即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 切点：磷酸二酯键 结果：产生黏性末端或平末端 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 限制酶 限制性内切酶 限制酶 黏性末端和平末端 限制酶所识别的序列有什么特点 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。 限制酶在原核生物中的作用 原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，但是，生物在长期的进化过程中形成了一套完善的防御机制，以防止外来病原物的侵害。 所以，限制酶在原核生物中主要起到切割外源DNA、使之失效，从而达到保护自身的目的。 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，恢复被限制酶切开了的两个核苷酸之间的磷酸二酯键，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 二、DNA连接酶——“分子缝合针” 二、DNA连接酶——“分子缝合针” 连接酶有两种：一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·coli连接酶。另一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4连接酶。 这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口，而不能连接单链DNA。 E·coli连接酶只能连接黏性末端； T4连接酶既可“缝合”黏性末端，又可“缝合”平末端。 DNA连接酶——“分子缝合针” DNA连接酶与DNA聚合酶一样吗？为什么？ 三、基因的载体——“分子运输车” 载体必须具备的条件： 1、能够在受体细胞中复制并稳定地保存； 2、具有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接； 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的 抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 ） 4、对受体细胞无害 载体的作用： 1、将外源基因转移到受体细胞中去。 2、利用运载体在受体细胞内，对外源基因进行大量复制。 常用的载体有： 质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等 质粒 ①广泛地存在于细菌中、②独立与拟核外、 ③能自主复制、 ④双链闭环DNA分子、 ⑤很小（大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一） 要对天然质粒进行人工改造 ; / 济南阳光女子医院 wpe47xrz 是在这里蹲点吧！”“你就不能配合点吗。”“你又没让我配合。”……被人遗忘的慕容凌娢终于从地上站了起来，但感觉自己的脑细胞正急速死亡，智商再次跌入谷底。韩哲轩怎么会知道我的真名？百蝶好像也知道他去找过夏桦。“呃……”慕容凌娢强壮镇定的笑了笑，“韩哲轩你怎么会在这里？”“百蝶不是说了吗，我就是在这里专门等你们的。”韩哲轩极其爽快的承认了自己的行为，“我看见你们两个出来，就跟上了。刚想叫住你就看见你往后摔了……幸好我闪的快……”这剧情跟我想的怎么不一样？按照言情小说的正常套路，我不是应该被人准确无误的接住吗？然后不就顺理成章的……慕容凌娢居然做起了花痴的白日梦。慕容凌娢把自己的幻想和现实仔细对照了一下，又看了看面前这个笑得漫不经心的人，悲痛的捂住了脸……童话里的故事果真都是骗人的……自己怎么能指望这种人呢？“凌