HAVHCV抗体检测---袁汀.pptVIP

* * * * * * * 肝炎检测技术（HAV、HCV-ELISA法） 主要内容 Part Ⅰ ELISA技术简介 Part Ⅱ HAV/HCV抗体检测 Part Ⅲ HAV/HCV相关知识 Part Ⅰ ELISA技术简介 底物显色 定性或定量的分析 原理 包被 反应 加入待测抗体或 抗原和酶标抗原 或抗体 洗涤 使结合在固相上 的抗原抗体复合物 与未结合的分离 1 2 3 4 固相的抗原或抗体 酶标记物（酶结合物） 酶反应的底物 三个必要试剂 双抗体夹心法 方法：用已知抗体包被，加入待检血清，再加酶标抗体，加底物显色 应用： 二价或二价以上的较大分子抗原测定 乙型肝炎表面抗原、甲胎蛋白、HCG等 E 固相抗体 标本（含抗原） 酶标抗体 E E 底物 竞争法 方法：用已知抗体包被，加入待测血清，再加酶标抗原，酶标抗原与待检物竞争与包被物结合。加底物显色。 应用：用于只有一个抗原决定簇的小分子半抗原（药物、激素等） 酶标抗原 E E E E 固相抗体 标本（含抗原） 底物 E 间接法 方法 用已知抗原包被，加入待测血清，再加酶标的抗人IgG（抗抗体或二抗）加底物显色。 优点 一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体 应用 常用于HCV抗体、HIV抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定 固相抗原 标本（含抗体） 酶标二抗 底物 E E E 捕获法 应用： 病原体急性感染诊断中的IgM型抗体 甲型肝炎HAV-IgM抗体 乙型肝炎病毒核心HBc-IgM抗体 捕获法 原理： 抗人IgMμ链抗体包被 捕获待测标本中IgM类抗体 加入特异性抗原和酶标记特异性抗原的抗体 底物显色 Part Ⅱ HAV/HCV抗体检测 丙肝病毒的检测方法 ☆ 血清生化学检测 ☆ HCV抗体检测 ☆ HCV核心抗原检测 ☆ HCV RNA 检测 试剂盒组成 包被反应板：固相的抗原或抗体 酶结合物：酶标记的抗原或抗体 显色剂：分A、B二瓶 终止液 对照：阳性对照，阴性对照 浓缩洗涤液 HCV样品稀释液 实验准备 配制洗涤液：用蒸馏水按1：20稀释浓缩洗涤液。 HCV-IgG实验操作 1、稀释：第一、二孔为阴、阳对照孔，其余各孔为样品孔，每孔中加入样品稀释液100ul 2、加样：分别加入阴、阳对照10ul。其余各孔为样品孔，各加入待测标本10ul，轻轻振荡混匀。 3、温育：封板→充分混匀后置37°C水浴60分钟 4、洗板：弃去反应条孔内液体，用洗涤液注満每孔，放置或振荡1分钟，弃去拍干→反复5次（注意：最后一次一定要拍干） 5. 加酶：每孔加入酶标试剂100ul 6、温育：封板→充分混匀后置37°C水浴30分钟 7、洗板：操作同步骤4 8、显色：每孔先加显色剂A 50ul，再加显色剂B 50ul，混匀后置37°C水浴15-30分钟 9、中止显色：每孔加入中止液50ul 10、判断结果： HAV-IgM实验操作 1、加样：分别加入阴、阳对照50ul。其余各孔为样品孔，各加入待测标本50ul，轻轻振荡混匀。 2、温育：封板→充分混匀后置37°C水浴20分钟 3、洗板：弃去反应条孔内液体，用洗涤液注満每孔，放置或振荡1分钟，弃去拍干→反复5次（注意：最后一次一定要拍干） 4. 加酶：每孔加入酶标试剂100ul 5、温育：封板→充分混匀后置37°C水浴40分钟 6、洗板：操作同步骤3 7、显色：每孔先加显色剂A 50ul，再加显色剂B 50ul，混匀后置37°C水浴15分钟 8、中止显色：每孔加入中止液50ul 9、判断结果： Part Ⅲ HAV/HCV相关知识 * * * * * * *