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实验二细菌革兰氏染色;实验目的
a. 复习细菌涂片标本的制备方法和普通染色的步骤和关键点
b. 掌握革兰氏染色法、芽孢染色法的步骤和关键点
c. 学习无菌操作技术
;实验原理
a. 革兰氏染色实验原理
b. 芽孢染色实验原理
;实验材料
显微镜,擦镜纸,载玻片,插镜纸,接种环,镊子,酒精灯;
革兰氏染液、孔雀绿染液;
香柏油,自来水,95%酒精;
苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis) , 大肠杆菌(Escherichia coli),四联球菌( Micrococcus tetragenus)
LB培养基;革兰氏染色实验步骤;2.干燥
在空气中自??干燥或在火焰快速通过干燥(与热固定同步进行).
3.热固定
用镊子夹住涂片一端,在火焰上连续通过几次;以载玻片在手背上试感觉不烫为宜.
;4.染色
初染 在固定的标本上加结晶紫染液1-2滴,染色1min,轻轻滴加水洗; 吸干,
媒染 滴加1-2滴革氏碘液媒染1min, 轻轻水洗,吸干。
脱色 滴加95%乙醇溶液(或30%丙酮乙醇脱色),轻轻摇动玻片至液滴无色,不要过分脱色(约30秒),立即轻轻滴加水洗;吸干。
复染 滴加蕃红染液复染2min,轻轻滴加水洗;
镜检 吸干载玻片背面及标本周围水渍,镜检;
;5.镜检结果绘图并表明革兰氏染色结果
注意标本中细菌的形态,大小,排列,和颜色.
革兰氏阳性菌为紫色;
革兰氏阴性菌为红色;
;;金黄色葡萄球菌(24hrs)染色结果;金黄色葡萄球菌(48hrs)染色结果;金黄色葡萄球菌(72hrs)染色结果;芽孢染色法(Schaeffer与Fulton氏染色法);(4)水洗、晾干或吸干。
(5)镜检:先低倍,再高倍,最后在油镜下观察芽胞、伴孢晶体和菌体的形态以及芽孢的着生位置。
结果:芽胞呈绿色,菌体和伴孢晶体为红色。
;2、伴孢晶体(parasporal crystal) ;作业;准备实验三 放线菌、酵母菌和霉菌的形态观察
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