医学分子生物学实验技术应用.ppt

第一章　蛋白质的分离纯化 生命大分子物质的特点： 1、生命大分子是动物、植物和微生物在进行新陈代谢时所产生的活性物质 2、生命大分子的特殊性和复杂性 3、生命大分子都是由简单的小分子构成的物 4、具有特殊的结构和功能 5、生命大分子不稳定 (1) 前处理 (pretreatment) 分离纯化某一蛋白质，首先要求把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来，并保持原来的天然状态，不丢失生物活性。 动物材料应先剔除结缔组织和脂肪组织。 (2) 粗分级分离 (rough fractionation) 当蛋白质提取液(有时还杂有核酸、多糖之类)获得后，选用一套适当的方法，将所要的蛋白质与其他杂蛋白分离开来。 一般这一步的分级分离用盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。这些方法的特点是简便、处理量大，既能除去大量杂质(包括脱盐)，又能浓缩蛋白质溶液。 有些蛋白质提取液体积较大，又不适于用沉淀或盐析法浓缩，则可采用超过滤、凝胶过滤、冷冻真空干燥或其他方法(如聚乙二醇浓缩法)进行浓缩。 (3) 细分级分离 (fine fractionation) 进一步纯化，一般使用层析法包括凝胶过滤，离子交换层析，吸附层析以及亲和层析等。必要时还可选择电泳法，包括区带电泳、等电聚焦等作为最后的纯化步骤。用于细分级分离的方法一般规模较小，但分辨率很高。 (4) 结晶 结晶过程本身也伴