第六章-基因功能研究技术.pptVIP

* Fire等发现将dsRNA注入秀丽线虫可显著抑制特定基因的表达，并证明了Guo和kemphues所发现的正义RNA的基因压制作用其实是转录时污染微量dsRNA所造成的。 将制备的RNA高度纯化后发现，正义RNA无基因抑制作用，反义RNA的基因抑制作用也很微弱，而用纯化后的dsRNA注入线虫，却能高效、特异地阻断相应基因的表达。实验证明双链RNA抑制基因的表达的效率比纯化后的反义RNA至少高几个数量 ，他们称此现象为ds RNA介导的RNA干扰（RNAi）。 在RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物，形成RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex, RISC）。激活RISC需要一个ATP依赖的将小分子RNA解双链的过程。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA。 RNA干扰的作用机制 （RNA诱导的沉默复合体的核糖体） RNA干扰技术研究基因功能 1. siRNA的设计与合成 不选择UTR区域 2. siRNA的转染 3.siRNA效果检测 GFP GFP+siGFP 第六章 分子生物学研究方法（下） 基因功能研究技术 基因功能的研究 基因表达系列分析技术、原位杂交技术