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变性梯度凝胶电泳（DGGE） hnxide 一、原理及定义 变性梯度凝胶电泳（denatured gradient gel electrophoresis，DGGE）最初是 Lerman 等人于20 世纪 80 年代初期发明的，起初主要用来检测 DNA 片段中的点突变，DGGE 是最灵敏的突变检测方法，其效率可达99%（Grompe 1993）。Muyzer 等人在 1993 年首次将其应用于微生物群落结构研究，现在该技术已经发展成为研究微生物群落结构的主要分子生物学方法之一 DGGE在微生物生态学中的应用 1）广泛应用于各微生物生态系统，包括土壤 ，活性污泥，人体和动物肠道，温泉，植物根系，海洋，淡水湖，油藏等。绝大部分研究都是通过扩增细菌或古细菌的 16S rRNA 基因来研究各生态系统中的细菌或古细菌群落多样性。也有用真菌的通用引物扩增 18S rRNA 基因 ，从而研究真菌的群落多样性。 2）能快速同时对比分析大量的样品。因此它既可以对比分析不同的微生物群落之间的差异，也可以研究同一个微生物群落随时间和外部环境压力的变化过程。 3）它可以跟踪监测细菌的富集和分离，从而评价不同培养基及培养条件对分离菌种的影响 4）检测单个纯菌 rRNA 基因的微异质性；比较不同的 DNA 提取方法；另外，它还可以辅佐筛选克隆文库以及检测 PCR 和克隆过程中的偏差 PCR反应