第六章重组体的筛选与鉴定2008-1.pptVIP

（2）Western blotting 电泳胶里的蛋白质带可以用电转的方法，转到膜上（硝酸纤维素膜、PVDF膜、中性尼龙膜等）。 ① Western（转膜） 胶里的蛋白质带在电场的作用下横向转移到正极一侧的膜上。 膜 胶 蛋白 Western装置 ② Blotting 原理与ELISA相同。 待测蛋白 硝酸纤 维素膜 一抗 二抗 辣根过氧 化物酶 底物 产物， 并发出光 PAGE胶 待测蛋白 底片曝光 辣根过氧化物酶：HRPO 1）先用一抗（待测蛋白的单克隆抗体）与 膜上的蛋白结合。 2）洗去未结合的一抗。 3）用二抗与一抗结合（二抗上带有HRPO）。 4）清洗掉未结合的二抗。 5）用HRPO的底物浸泡膜。 6）暗室里曝光，冲洗胶片。 ③ Blotting过程 Immuno Blotting ④结果 多克隆抗体Blotting的结果 单抗blotting结果 转译筛选法有两种:杂交选择转译（hybrid selected translation,HART)杂交抑制转译(hybrid arreated translation,HRT)。 转译筛选法的突出优点是将克隆的DNA同所编码的蛋白质产物之间的关系对应起来。 第六节 转译筛选法 借助无细胞翻译系统，通过表达或抑制所选择的克隆载体上外源基因的转录，来筛选其产物是否符合预期。 一、无细胞翻译系统