Q_zupei001-2018迷你玫瑰组织培养快速繁育技术规程.pdf

迷你玫瑰组织培养快速繁育技术规程 目 录 前言2 1无菌培养基配置3 1.1MS培养基母液的配制3 1.2 母液的保存3 1.3 培养基配制3 1.4 培养基灭菌3 2 外植体接种及培养4 2.1 外植体的选择4 2.2 外植体预处理4 2.3 外植体消毒灭菌4 2.4 外植体清洗5 2.5 防止内生菌处理5 2.6 防止褐化5 2.7 接种培养5 3 实例6 3.1材料选取与处理6 3.2 外植体消毒6 3.3无菌苗培养6 3.3.1 增殖培养6 3.3.2 生根培养7 3.4 驯化移栽7 前言 本标准由泉州台商投资区旭日生物科技有限公司提出 标准起草单位：泉州台商投资区旭日生物科技有限公司，华侨大学花卉工 程研究所 本标准主要起草人：彭金彬 刘靓 张鹏 卢建龙 许翔 梁琦 翁渠 张君毅 迷你玫瑰组织培养快速繁育技术规范 1 无菌培养基配置 1.1MS 培养基母液的配制 按照MS培养基配方配制大量元素母液 （10倍）、微量元素母液 （100 倍）、 铁盐母液 （100倍）、有机物母液 （100倍）。在配制时，各组分分别进行溶解再 进行混合，防止沉淀形成。植物生长调节剂配制注意需要稀酸、稀碱或95%乙醇 溶解，然后纯净水稀释定容，配制浓度为1mg/ml。 1.2 母液的保存 将配制好的母液分别从容量瓶移入试剂瓶中，贴好标签，注明名称、浓缩倍 数、配制日期和配制人员。注意应将易分解、氧化的溶液放入棕色试剂瓶中保存 4 （如铁盐母液），贮藏于 ℃冰箱中。 1.3 培养基配制 根据所需的培养基的量，准确计算并移取相应量的母液，加入植物生长调节 剂，加入蔗糖 （30g/L）和琼脂 （6.5g/L），加热完全溶解，搅拌充分均匀，调节 pH 定容。 1.4 培养基灭菌 将配制好的培养基置于高压灭菌锅进行灭菌，灭菌温度为121℃，时间为15～ 20min。 2 外植体接种及培养 2.1 外植体的选择 选择生长状况良好、无病虫害的带腋芽茎段作为外植体，茎节上不同节位的 腋芽增殖率差异较大，一般中间部位的腋芽发育较快，即选择半木质化的带芽茎 段作为外植体。 2.2 外植体预处理 1 5mm 将选取好的健壮茎切成约 厘米的小茎段，芽距顶端需保留 左右，每个 茎段带一个腋芽，放在烧杯中，用纱布封口后自来水冲洗30min 左右，可用洗涤 剂。此处理能减少大量附着于外植体表面的污渍和病菌。另外，迷你玫瑰容易滋 生白粉病、锈斑病等，为减少由病原菌引起的污染，可预培养两三天后，再进行 外植体的消毒和接种工作，以降低玫瑰组织培养的污染率。 2.3 外植体消毒灭菌 外植体灭菌方法较多，所用药剂也不一致，通常以自来水冲洗后采用75%酒 精消毒，时间不超过60秒，再以0.1%升汞消毒6～15分钟。灭菌时间对消毒效 果影响最大，消毒液浓度和方式次之。但消毒时间过长会使植物中毒，失去萌发 力。对于迷你玫瑰，将自来水清洗过后的外植体放在75%酒精中浸泡6～10秒， 接着用0.1%升汞浸泡8～12min 左右。 2.4 外植体清洗 为防止残留升汞等消毒剂对外植体的毒害作用，将经过升汞灭菌的外植体用 无菌水冲洗3～8次，冲洗时尽量充分摇晃烧杯，将残留的升汞最大限度去除。 2.5 防止内生菌处理 为防止内生菌可选用硫酸庆大霉素为抗生素，浓度为0.1%，即将消毒洗涤后 的外植体浸泡硫酸庆大霉素后即进行接种。为防止组培外植体对抗生素的依赖， 硫酸庆大霉素的浓度不宜过高，时间不宜过长，可视效果后停止使用。 2.6 防止褐化 接种后切口表面如果分泌多酚，多酚的氧化会使外植体容易褐化而死亡，在 培养基中加入