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免疫学原理及检测 技术支持部 胡贺 主要内容 免疫学基本内容 血清学一般特点 ELISA方法的技术根据 ELISA方法的种类 影响因素 中山生物产品 各类产品简介 免 疫 学 一门自然科学，从研究机体对传染病的抵抗力开始，是微生物学的一个分支，但随着科技的发展，成为了一门独立的学科。 免疫学反应 是抗原与抗体的反应，仅在高等脊椎动物中存在。 这是已知的最精妙复杂的身体抵御外部物质的系统。 抗原(Antigen) 抗原是指能刺激机体免疫系统产生免疫应答而生成抗体和致敏淋巴细胞等免疫应答产物，并能与之发生特异性结合的物质。 具有免疫原性和反应原性。一般抗原都是外来物，如细菌、病毒、寄生虫、大分子蛋白等 。 抗体(Antibody) 机体受外来抗原物质刺激后，产生的一种能与该抗原发生特异性结合的免疫球蛋白(Ig)。 免疫球蛋白分类 Ig通常是指具有抗体活性和（或）抗体样结构的球蛋白。应用免疫电泳与超速离心分析可将Ig分5类： IgG、IgA、IgM、 IgD、 IgE。 IgG：含量最多或最主要的Ig（75%），唯一能够通过胎盘的Ig。主要由脾脏和淋巴结中的浆细胞合成与分泌。　 IgM：分子量最大，由5个IgM单体通过J链连接。是最早出现的Ig，是抗原刺激后最早出现的抗体，其杀菌、溶菌、溶血、促吞噬以及凝集作用比IgG高500~1000倍 IgG抗体的结构及与抗原的反应 血清学反应的一般特点 1、抗原、抗体的结合具有特异性，但当有共同抗原、抗体存在时，会出现交叉反应。 2、抗原、抗体的结合是分子表面的结合，这种结合虽相当稳定，但是可逆的。 3、抗原、抗体的结合是按一定比例进行的，只有比例适当时，才能出现可见反应。 最适比例示意图 血清学反应的一般特点 4、血清学反应大体分为两个阶段进行，但其间无严格界限。第一阶段为抗原抗体特异性结合阶段，反应速度很快，只需几秒至几分钟反应即可完毕，但不出现肉眼可见现象。第二阶段为抗原抗体反应的可见阶段，表现为凝集、沉淀、补体结合反应等。反应速度慢，需几分、几十分以至更长时间。 酶联免疫吸附试验 enzyme linked immuno-sorbent assay ELISA ELISA方法的技术根据 抗原或抗体能结合到固相载体的表面，并保持其免疫活性。 抗原或抗体与酶连接所形成的结合物仍保持免疫学和酶的活性。 在测定时待测血清与固相载体的抗原或抗体结合，然后再加入酶标记的抗原或抗体，形成复合的结合物，最后加入底物溶液，与酶反应的颜色深浅与标本中相应抗原或抗体的量成比例。 ELISA 方法的种类 双抗体夹心 ELISA 法示意图 影响因素 试剂因素 标本因素（内源性、外源性） 操作因素 试剂因素 选择优良的检测试剂，操作前平衡到室温 不同批号的试剂不能混用 在有效期内使用 标本因素(外源性干扰) 标本应避免溶血，细菌的污染(假阳性)； 抗凝不完全的标本(假阳性)，建议尽量不用抗凝剂血尤其是肝素抗凝剂； 标本保留时间过长(间接法本底值增高)，如需保存一周以上，则应-20℃保存,融解后应充分混匀； 标本间应避免交叉污染，不应与生化标本共用同一管标本； 不能用NaN3防腐。 标本因素(内源必干扰) 类风湿因子（假阳性） 检测抗原时可用2-巯基乙醇加入到标本稀释液中,使其降解或F(ab)2代替完整IgG。 补体（假阳性） 可用EDTA稀释标本或灭活补体。 嗜异性抗体、自身免疫性抗体、交叉反应物质等。 操作时影响因素 加样应加在孔的下1/3处，注意不可溅出或有气泡产生。 加样应每人一吸头，防止交叉污染。 样本的稀释(目的是减少非特异性反应) 要先加稀释液再加标本并用微量振荡器混匀30秒。 加试剂时应摇匀并弃去第一滴。 洗涤应彻底。 中山生物产品 乙型肝炎病毒血清标志物检测 HBsAg ★ 常用ELISA法检测。 ★ 目前HBsAg诊断试剂质量较高，灵敏度可达 0.2ng/L。从全国室间质控评价结果显示，阳  性标本率达到或超过98％。 ★ HBsAg滴度越高，HBeAg、HBV DNA阳性的可能性越大。 ★ 血液与肝组织的HBsAg含量并不完全相关。 为什么血清HBsAg阴性不能排除HBV感染？ ★ 检测试剂不够敏感。 ★ S基因变异（抗原性发生改变）。 ★ X基因变异（转录受抑制）。 ★ 重叠HCV感染（