实验十三微生物生理生化.pptVIP

实 验 十三 微生物生理生化反应 —IMViC试验 微生物生理生化反应（IMViC） 目的要求 基本原理 实验材料 实验步骤 实验报告 目的要求 了解微生物生理生化反应的类型及意义； 掌握IMViC反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。 基本原理 ★ 微生物体内各种酶系统控制的复杂多样的生化反应完成 ；测定微生物某些酶类的有无、对底物作用与否、反应的条件、反应的产物及代谢方式都属于生理生化实验内容。 ★在培养基内或在培养完成之后加入特定的指示剂就可确定所发生的生理生化反应类型。 ★常用的试验：糖代谢试验、氨基酸和蛋白质代谢试验、氮源和碳源的利用试验及酶的试验等。 基本原理 IMViC是吲哚(indol?test)、甲基红(methy1?red?test)、伏一普(Voges-Prokauer?test)和柠檬酸盐(citrate?test)四个试验的缩写，I是在英文中为了发音方便而加上的。这四个试验主要是用来快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌(Enterobacter?aerogenes)，多用于水的细菌学检查。大肠杆菌虽非致病菌，但在饮用水中若超过一定数量，则表示受粪便污染。产气肠杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水时要将两者分开。 基本原理 吲哚试验是用来检测吲哚的产生。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰吲哚。但并非所有微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，因此吲哚试验可以作为一个生物化学检测的指标。色氨酸水解反应： 吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应：? 大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。 基本原理 甲基红试验。某些细菌在糖代谢过程中，将培养基中的糖先分解为丙酮酸，丙酮酸再分解为甲酸、乙酸、乳酸等，因而使培养基变酸，用甲基红指示剂[pH4．2（红色）-6．3（黄色）]，可使培养基由原来的桔黄色变为红色，即甲基红阳性反应。 大肠杆菌为阳性反应，产气肠杆菌为阴性反应。 基本原理 伏-普试验。某些细菌可利用葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸进行缩合，脱羧变成乙酰甲基甲醇，此物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物，即伏-普反应阳性，没有红色化合物产生则为阴性。其反应过程如下： 　　产气肠杆菌伏-普反应阳性，大肠杆菌伏-普反应阴性。 基本原理 柠檬酸盐试验。有些细菌能利用柠檬酸钠作为碳源，例如大肠杆菌；而另一些细菌不能利用柠檬酸钠，例如产气肠杆菌。细菌在分解柠檬酸盐及培养基中的磷酸铵后，产生碱性化合物，使培养基的pH升高，在有1%溴麝香草酚蓝指示剂的情况下，培养基由绿色变为深蓝色。溴麝香草酚蓝的指示范围为：pH小于6．0时呈黄色，pH在6．0-7．6时为绿色，pH大于7．6时呈蓝色。 实验材料 菌种：大肠杆菌，产气肠杆菌； 培养基：蛋白胨水培养基，葡萄糖蛋白胨水培养基，柠檬酸盐斜面培养基 。 试剂：甲基红试剂，40％KOH，5％α-萘酚，乙醚，吲哚试剂等 。 实验步骤 1.接种与培养 将上述二菌分别接种于2支蛋白胨水培养基中（做吲哚试验），4支葡萄糖蛋白胨水培养基中（做甲基红试验与伏-普试验），2支柠檬酸盐斜面培养基中。置37℃温室培养48 h以上。 实验步骤 2.结果观察 (1)吲哚试验：培养后取出，先加入乙醚约1ml（使呈现明显的乙醚层），充分震荡后，沿试管壁缓缓滴加吲哚试剂5-10滴，观察有无红色环出现。注意：加入吲哚试剂后不可再动摇!有红色环出现者为阳性，反之为阴性 。 　　(2)甲基红试验：将葡萄糖蛋白胨水培养物加甲基红试剂 2滴，培养基变红色者为阳性，变黄色者为阴性。 　　(3)伏-普试验：培养物中加入等量的VP试剂，用力振荡，再放入37℃温箱中保温15-30 min，以加快反应速度。若培养物呈现红色者为伏-普反应阳性。 　　(4)柠檬酸盐试验：观察柠檬酸盐培养基上有无细菌生长和是否变色。蓝色为阳性，绿色为阴性。 实验报告 1.结果 将实验结果填入下表。“ +”表示阳性反应；“-”表示阴性反应。 实验报告 2.思考题 （1） 为什么说进行生理生化试验必须是纯培养？ （2） 培养物中的吲哚是怎样产生的？又是通过什么方法来测定的？ * * 产气肠杆菌 大肠杆菌 柠檬酸试验 伏-普试验 甲基红试验 吲哚试验 IMViC试验 菌 名 * * * * *