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阳离子抗菌肽的研究进展 摘要 抗菌肽(antibacterial peptides)广义上是指在多种生物天然免疫系统中，具有抗菌活性的一类小分子多肽[1]。世界上第一种抗菌肽天蚕素（cecropins）是20世纪70年代研究昆虫免疫系统时所发现的一类具有抗菌特性的小分子多肽。此后，人们又相继在各种动物(哺乳动物、两栖类等)以及植物[2]体内分离到抗菌肽，某些细菌也能产生并分泌类似的具有抗菌活性的多肽。由于这类多肽具有广谱高效杀菌活性，因而被命名为抗菌肽。随着研究工作的不断深入，人们发现某些抗菌肽还对部分真菌[2]、原虫[3]、病毒[4]甚至癌细胞[5]具有明显的杀伤作用，是一类具有重要潜在应用价值的活性物质。因此许多学者对这类活性多肽倾向于称之为antimicrobial peptides(AMP)或肽抗生素(peptide antibiotics)。 阳离子抗菌肽(cationic antibacterial peptides)是植物和动物产生的一般由12～50个氨基酸残基组成的阳离子型(含过多的赖氨酸和精氨酸 )的两亲性分子。其在广义上是指存在于生物体内具有抵抗外界微生物侵害、消除体内突变细胞的一类小分子阳离子多肽[6]。目前为止，世界上已知的抗菌肽共有1200多种[7,8]。意大利的里雅斯特(Trieste)大学的抗菌肽数据库(www.bbcm.univ.trieste.it/～tossi/pag1.htm)总共收录了895种抗菌肽。据统计，在所发现的抗菌肽中绝大多数为阳离子型抗菌肽，有近700种阳离子抗菌肽，而以天然阳离子抗菌肽作模板进行人工合成的模拟肽有数千种[9]。 1．阳离子抗菌肽的理化性质 抗菌肽的理化性质现已基本清楚，主要有以下几点：1) 相对分子质量小(4kD左右)，氨基酸组成约15～45个 ；2) 热稳定性高。100 ℃加热10～15 min，仍能保持一定的活力；3) 水溶性好；4) 等电点大于7，一般在8. 9～10. 7之间，具有较强的阳离子特征； 5) 对较高或较低的pH和较大的离子强度都有较好的抗性；6) 具有两亲α-螺旋和(或)两亲β-折叠结构[6] 有些阳离子抗菌肽在121℃、1.5×105Pa的高温高压下处理 30min仍能保持原有活性，说明抗菌肽具有热稳定性。阳离子抗菌肽在较大的离子强度和较低或较高的pH值下仍可保持较强的活性。此外，部分阳离子抗菌肽还有抵抗胰蛋白酶和胃蛋白酶水解的能力[6] 2．阳离子抗菌肽的结构特点 抗菌肽具有广谱抗菌和其他优良的特性，与它自身的结构特点密不可分。虽然抗菌肽种类繁多，来源不同，但它们的一级结构(即氨基酸序列) 具有较强的保守性，主要有以下几个特点：① N端多富含碱性氨基酸(如Lys和Arg)，呈强碱性，含过剩的正电荷，使抗菌肽呈阳离子特性；② 绝大多数抗菌肽的第二位氨基酸残基是Trp，它对抗菌肽杀菌活性的高低起着至关重要的作用；③ C端通常酰胺化，呈中型疏水性，富含Ala、Val、Gly等非极性氨基酸，可能与抗菌肽的广谱抗菌活性有关；④ 抗菌肽中间富含Pro，直接影响抗菌肽的杀菌活性。 抗菌肽的二级结构是其攻击病原体的关键。在一定条件下，其N端易形成α-螺旋，中间易形成β-折叠，这样就使抗菌肽具有两亲性，易于对病原体及病灶细胞的膜进行攻击。除了α-螺旋和β-折叠肽外，还有许多抗菌肽存在，对其结构了解甚少。如革兰氏阳性菌产生的一些阳离子抗菌肽(如乳链菌肽)只含有2个α-螺旋结构；Trabi等从猕猴的白细胞中发现由18个氨基酸组成的环肽RTD-1是一个延伸的β-发夹构型[10]。 2．阳离子抗菌肽的分类 阳离子抗菌肽从结构特征上可分为α-螺旋肽和β-折叠肽。其中α-螺旋肽主要包括杀菌肽类、爪蟾抗菌肽(magainin)、cathelindin等[11~13]；还有一些结合脂多糖的α -螺旋肽，如来源于兔粒细胞中的脂多糖结合蛋白CAP18[14]。 β-折叠肽来源于许多动物和植物中，与α-螺旋肽相比，其结构相对复杂，不同肽的β-折叠程度差别较大，且许多β-折叠肽中含有α-螺旋单元。β-折叠肽主要包括哺乳动物α和β防御素、植物防御素、昆虫防御素、富含脯氨酸的抗菌肽等；其他研究得较多的β-折叠肽还有protegrin及tachyplesin[15]。 3 阳离子抗菌肽的生物活性 3.1　阳离子抗菌肽的抗菌特点 阳离子抗菌肽既可杀灭或抑制革兰氏阳性菌，又可杀灭或抑制革兰氏阴性菌，其广谱抗菌特性是传统抗生素所无法比拟的。与传统抗生素相比阳离子抗菌肽具有以下的特点： 3.1.1广谱性： 阳离子抗菌肽的抗菌谱较传统抗生素宽，传统抗生素通常只对细菌有效，而来自昆虫、猪、蛙、人等的阳离子抗菌肽既有抗革兰阳性菌和革兰氏阴性菌作用，又有抗真菌、抗病毒作用[ 16,