克隆基因表达系统.pptVIP

（三）、优化外源基因在真核细胞中表达的策略 转录水平的优化 翻译水平的优化 防止外源基因失活 多基因策略 1. 转录水平的优化最经济，最有效的基因表达调控方式 选择合适的启动子或构建复合式启动子 正确利用增强子 正确使用内含子 3、防止外源基因失活 位置效应是引起基因沉默的一个重要因素，在构建表达载体时，可以通过连接核基质结合区或转移完整的功能域来清除。 连接核基质结合区（Matrix Attachment Region,MAR ），是存在于真核细胞染色质中的一段与核基质特异结合的DNA序列。使每个转录单元保持相对的独立性，免受周围染色质的影响。减少位置效应 转移完整功能域，提高基因表达 4、多基因策略 ‘黄金稻’的培育 pIN III系列：pINIII comA1-3 强启动子：Ipp（脂蛋白基因启动子）和lacUV5启动子 调节基因：lac I S-D序列和起始密码ATG 分泌信号肽 大肠杆菌外膜蛋白基因ompa 插入位点区（多克隆位点）。 Ipp---lac-----lacO----S-D/ATG—ompa----插入位点 pIN III-comA1 以pBR322为基础构建的 调节基因不必借助于宿主的lacI. 分泌型表达载体----pINIII-ompA1 lac 3. 融合蛋白表达载体系统----pGEX系列 表达出的外源基因产物蛋白是与质粒载体上的菌