RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型.DOCVIP

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2019-09-30 发布于天津
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RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型.DOC

附件检测汉坦病毒基因及分型材料急性期病人血清鼠肺鼠血或分离的汉坦病毒引物引物序列位置片段逆转录引物通用外引物型特异性引物汉滩病毒汉城病毒片段引物方法病毒的提取采用按说明提取制备模板逆转录合成采用或逆转录酶按说明书进行扩增反应条件为预变性分钟秒秒秒扩增个循环延伸分钟扩增产物用琼脂糖凝胶电泳鉴定若条带的分子量与预期片段大小相同则表明为特异性扩增产物必要时可进行片段的回收和核苷酸序列测定切下特异分子量条带用凝胶回收试剂盒回收按其说明书进行自动测序仪测序意义扩增到特异性条带可确诊汉坦病毒并明确其型别序列

附件6 RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型材料：（1）急性期病人血清、鼠肺、鼠血或分离的汉坦病毒（2）引物：引物序列（5’～3’）位置片段（bp）逆转录引物 TAGTAGTAGACTCC 1~14 LMS 通用外引物 AAAGTAGGTGITAYATCYTIACAATGTGG 1910~1939 M(+) GTACAICCTGTRCCIACCCC 2373~2354 M(-) 型特异性引物汉滩病毒 GAATCGATACTGTGGGCTGCAAGTGC 1958~1984 M(+) GGATTAGAACCCCAGCTCGTCTC 2318~2340 M(－)

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