AnnexinV-APCPI细胞凋亡检测试剂盒.PDFVIP

AnnexinV-APC/PI 细胞凋亡检测试剂盒 AnnexinV-APC/PIApoptosisDetectionKit 说明书修订日期：2019.08.23 Catnumber：KGA1030-20assays KGA1030-50assays KGA1030-100assays Storeat2-8℃for12months,protectedfromlight ForResearchUseOnly （科研专用） 一、试剂盒说明 在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中 2+ 的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。AnnexinV 是一种分子量为35~36kD 的Ca 依赖性磷脂结合 蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。 因此AnnexinV 被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将AnnexinV 进行荧光素APC 标记，以标记了 的AnnexinV 作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶（PropidiumIodide,PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细 胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将AnnexinV-APC 与PI 匹配使用，就可以将处于不 同凋亡时期的细胞区分开来。 本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测（不推荐用于检测组织样本）。 二、试剂盒组份 组份 Cat: KGA1030 Cat: KGA1030 Cat:KGA1030 储存条件 20assays 50assays 100assays AnnexinV-APC 100μL 250μL 500μL 2-8℃避光 PI染液 100μL 250μL 500μL 2-8℃避光 BindingBuffer 10.0mL 25mL 50mL 2-8℃ 注：1、AnnexinV-APC 组份建议按需分装小份冻存于-20℃，避免反复冻融； 2、PI和BindingBuffer组份不用时可放置于4℃保存，PI需要避光。 三、试剂盒以外自备仪器和试剂 流式细胞仪或荧光显微镜、低速离心机、微量移液器 1.5mL Microtube、载玻片、盖玻片（荧光显微镜观察需用）、PBS、不含EDTA 的胰酶消化液 四、使用注意事项 1. 微量试剂取用前请离心集液。 2. Annexin V-APC/PI 避光保存及使用。 3. PI 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。 5， 4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于 1×10 ，不推荐用于检测组织样 本。 5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议用不含 EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳 性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含 2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。 6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。 7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建 议每次检测均需使用经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。 五、操作方法 1. 悬浮细胞离心 （2000rpm离心5min）收集；贴壁细胞用不含EDTA 的胰酶消化收集 （注：胰酶消化时 间不易过长，否则容易引起假阳性）； 5 2. 用PBS洗涤细胞二次 （20