西北农林科技大学生命学院大三上基因工程实验报告.docVIP

西北农林科技大学 基因工程实验报告 小麦GAPDH截短体重组与表达 小麦 GAPDH 截短体的重组与表达 实验思路： 小麦总RNA提取 小麦总RNA提取 RT-PCR扩增小麦GAPDH基因 pGEX-4T-1质粒提取 目的蛋白诱导表达 目的蛋白Western Blotting检测 表达载体构建 菌株转化 实验及仪器： 高速冷冻离心机、低温冰箱、液氮罐、研钵、剪刀、镊子、PCR扩增仪、台式离心、恒温水浴锅、微量移液器、培养皿、带帽试管、涂布器、无菌操作台（含酒精灯、接种环、灭菌牙签等）、恒温摇床、1.4ml EP 管、培养皿、电转印、摇床、紫外灯、恒温水浴箱、电泳仪系统、凝胶成像系统等 实验步骤： 小麦总 RNA 提取（Trizol 法） 材料：小麦幼苗 试剂配制及器具处理 0.1%的 DEPC H2O（DEPC：焦碳酸二乙酯） 器具处理：试剂瓶、量筒、研钵、大小枪头和 1.5ml 和 0.2ml 的 EP 管等用纱布刀、镊子和药匙等 160℃烘烤 6h 以上。 无 RNA 酶灭菌水（DEPC H2O）：用将高温烘烤的玻璃瓶 （180℃×2h）装蒸馏水，然后加入 0.1%的 DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。 Trizol 试剂 75%乙醇：用新打开的无水乙醇和 DEPC 处理过的水配制 75%乙醇（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱