荧光显微技术.pptVIP

荧光显微镜 一 . 荧光显微镜的原理 某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时, 就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如见光)，这种光就称为荧光。 荧光显微镜利用特殊的照明装置发出较短波长的激发光，诱发荧光物质发出荧光,通过物镜作用在样品上，在有目镜观察到肉眼可见的荧光。 二.荧光显微镜的结构 主要结构有机械系统和光学系统两部分，如图 1.机械系统：包括底座、镜身、观察筒三部分 2.光学系统: 包括物镜、聚光镜、光源等 三.荧光显微镜的操作及注意事项 1．基本操作步骤 (1)安装紫外防护罩。 (2)打开高压汞灯的电源控制箱开关。 (3)插入挡光板，中断光路。 (4)预热5—10分钟。 (5)将载有样品的载玻片放到载物台上。 (6)选择接物镜(按照先低倍，后高倍顺序)。 (7)旋转分光镜组件转盘，选择所需要的分光镜组件：“O”为观察透射光时用；“WU”为观察蓝色荧光时用(如DAPl)；“WB”为观察绿色荧光时用(如FITC)；“WG为观察红色荧光时用(如TRITC)。 (8)使用阻断滤片(目前多数阻断滤片内置于荧光显微镜)。 (9)通过粗、细螺旋调整焦距。 (10)打开与显微镜连接的计算机，点击数码成像系统软件，采