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- 2020-04-14 发布于湖北
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高效液相色谱法分析条件的选择
永州职业技术学院 王文渊
HPLC法色谱条件的选择
1. 固定相的选择(首选化学键合相):
选分布均匀、粒径小的球形固定相(≤10μm)
2.流动相的选择:
与固定相不反应且不相溶;对试样品有良好溶解度;粘度小、纯度高、低流速的流动相—甲醇(1ml/min) ;与检测器匹配:UV(溶剂不吸收紫外光);使用前过滤、脱气。
4.洗脱方式的选择
等度洗脱(恒组成溶剂洗脱):固定配比的溶剂系统洗脱组分。
梯度洗脱:在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例,即不断改变其极性(两个泵)。
3. 柱温的选择:
选室温25℃左右
5.检测器的选择
样品有紫外吸收时使用紫外检测器;
样品或其衍生物能产生荧光时使用荧光检测器
(适合于药物和生物化学样品的分析)。
样品有氧化还原性质时使用电化学检测器;
折光率检测器(是一种通用型检测器)。
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