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G蛋白信号的多个表面 海蒂-E-哈姆 （来自美国芝加哥西北大学神经科学、医学学校，分子药理学与物理化学系） 大量的激素，神经递质，趋化因子，局部介质与感官刺激通过与偶联的G蛋白受体结合，来对细胞与器官产生影响。现在，已经有超过1000种这样的受体为人所知，并且，越来越多的的受体正在随着时间的推移陆续被发现。异源三聚体G蛋白转换配位体使之与受体结合进入细胞进行反应，这成为组织与器官生理应答的基础。在决定细胞对信号反应的专一性和暂时性方面，G蛋白扮演了重要的角色。G蛋白由α、β、γ三种亚基构成，并且尽管编码每个亚基的基因产物有很多（编码α、β、γ的基因产物已知。），但四种主要类别的G蛋白是可以被区分的：Gs，用来激活腺苷酸环化酶，Gi,用来抑制腺苷酸环化酶，Gq, 用来激活磷脂酶C，G12和 G13的功能还未知。 与GDP偶联的G蛋白是未被激活的，异源三聚体状态，它可以通过鸟嘌呤核苷酸的催化受体交换使GTP偶联到α亚基上而被激活。GTP的偶联导致Gα?GTP从Gβγ亚基上分离，并通过偶联的GαGTP和自由亚基Gβγ来激活下游的效应器。当Gα亚基水解GTP形成GDP时，G蛋白的钝化作用对细胞反应的关闭和开启起限速作用。最近，异源三聚体G蛋白在非活性构象和活性构象方面晶体结构得到解决，这为我们理解其在信号传递途经中作为构象开关的角色提供了结构依据。随着越来越多新颖的途经用于G蛋白的暴露，我们对G蛋白信号调控机制的多样性的认识也在不断增加。介绍G蛋白的结构，作用机制以及G蛋白信号通路的作用规则的研究进展是本文的主题。由于空间有限，我只重点介绍近期的研究结果，所以读者可以直接看到之前研究中的一些优秀的观点。 G蛋白的结构 Gα亚基包含两个域，其中一个域参与GTP的偶联与水解（G域），它与GTP酶总科结构上完全相同，包括小G蛋白，伸长因子与用来携带GTP进入核心的蛋白质一种独特螺旋形域。异源三聚体G蛋白的β亚基有一个分为7部分的β螺旋桨结构，该结构是基于其7WD-40的重复序列。γ亚基与β亚基通过N端螺旋线圈相互作用，并一直以β亚基为基础进行广泛接触。这种由β亚基和γ亚基形成的功能单元是不可分离的，除非变性。通过受体引导GTP耦合在Gα亚基，可以激活G蛋白。这种在Gα亚基上的GTP调节开关的结构性质是一种改变，一种在三个用来指定开关1,2,3顺序的灵活区域的构象的改变，由偶联的GTP激活，是一种对Gβγ低亲和力的构象。这将导致感受器对GGTP亲和力的增加，加速亚基的分离，增加自由的Gβγ子代，而这些子代又可以激活大量的效应器。 激活G蛋白的受体机制 共轭G蛋白的受体们都有一个共同的横剖面图，那是带有7个跨膜螺旋的横剖面图；连接这些螺旋的细胞内循环形成了G蛋白链接域。尽管没有高分辨率的共轭G蛋白受体的结构被确定，但是，最近一种低分辨率的电子衍射视紫红质，共轭G蛋白的受体结构被展示，它显示了7种横跨膜的α螺旋线的位置和方向。 这些关于共轭G蛋白受体的生化试验与诱变反映了受体的激活是由于配体结合引起跨膜螺旋3和6相对取向的变化。然后这些改变影响了受体的构象，这些受体是细胞内循环时相互作用的G蛋白。并将之前被覆盖的G蛋白的结合位点暴露出来。当一个激活的受体与异源三聚体G蛋白进行反应时，它诱导GDP从G蛋白释放。人们认为与G蛋白上结合位点接触的受体距离耦合GDP的口袋较远，因此得出受体必须在特定的距离工作才能改变蛋白的构象。因为GDP包埋在细胞内部，Gα的两个域之间，所以改变一些域间的相互作用是必要的。在GDP被释放和GTP缺乏的情况下，在激活的受体和异源三聚体之间，一种稳定的络合物形成了。这种叫“空口袋”的构象引起了人们极大的兴趣，但它的结构现在还是未知的。 在G蛋白上连接受体的区域是什么？它们是怎样激活G蛋白的呢?GDP偶联异源三聚体G蛋白Gt和Gi的构象显示了GDP偶联异源三聚体和表面能与其他蛋白相互作用的剩余物的整体形状，并且为G蛋白受体反应区域生化性质多样性的理解和突变形成的研究提供了结构环境。α亚基的N端和γ亚基的C端都是脂修饰的位点。在异源三聚体内，这些脂修饰区是相互靠近的，表明是膜附着的位点。有证据表明受体与表面的三个亚基全部连接。 在α亚基上，最主要的受体接受区是在C末端。在异源三聚体晶体结构中，α亚基上最后7个亚基酸是无序的，并且从组合肽库中对受体结合肽的选择分析表明这7个残基是最关键的。利用嵌合G蛋白亚基的研究证实，事实上对受体G蛋白相互作用的特异性来说，最后的5个残基最为重要。简练的诱变研究已经证实，受体细胞内第三循环的C末端连接在Gα亚基上的C末端区域。就M2毒蕈碱受体耦合Gi来说，对于认识Gαi/o的C末端由决定作用的确切受体残留物已经被清楚的解释阐明了。 一个更大的区域的Gα亚基的C-末端区域，以及N-末