抗体PE荧光素标记操作流程记录.doc

巴德生物科技有限公司 第 第 PAGE 4 页 共 NUMPAGES 4 页 目的 规范单克隆抗体标记荧光PE (快速标记法）标准操作程序 适用范围 适用于本公司抗体标记荧光PE (快速标记法）操作 术语和定义 藻红蛋白，简称“PE”。相对分子质量较大，约为240kD，最大吸收峰为564nm。 职责和权限 实验员负责实施本规范，主管负责人监督执行。 实验试剂. 溶液配制 0.01mol/L PBS溶液配制 0.01 mol/L Phosphate Buffered Saline，pH 7.40 试剂名称 配方量 批号 用量 Water 1L NaCl（MW 58.44） 0.799g KH2PO4（MW 136.09） 0.2g KCl（MW 74.55） 0.2g Na2HPO4·12H2O（MW 358.14） 2.89g 调节pH 7.40后，加水定容至1.0L，再调节pH至7.40，过滤备用。 Storage Buffer，pH 7.40 试剂名称 配方量 批号 用量 0.01mol/L PBS / BSA 0.5% NaN3 0.1% 调节pH 7.40后，加水定容至1.0L，再调节至pH 7.40。 其他试剂 试剂名称 厂家 批号 活化液（modifier） 淬灭剂（quencher） PE荧光素 操作流程 抗体活化 将抗体用0.01mol/L PBS稀释为1mg/mL，加入 mL 活化液(体积比为抗体溶液：反应活化液=10:1），旋涡振荡器混匀后，室温避光反应10min。 与PE反应形成共轭物 将抗体混合液（步骤6.1）加入 mg PE荧光素中（加入量：抗体与荧光素质量比为1:1），在室温条件下避光反应3小时，反应开始时间 ： 至结束时间 ： ；（或2-8度条件下避光过夜）。 荧光淬灭 向共轭物（步骤6.2）中加入 mL 淬灭剂（淬灭剂添加量按抗体体积：淬灭剂体积=10:1添加）。混匀后，室温孵育30分钟，去除游离的荧光素的荧光效应。淬灭开始时间 ： 至结束时间 ： 。 层析 将共轭物（步骤6.3）层析柱分离，进一步去除游离的荧光素或抗体。 保存 收集得到的标记抗体（步骤6.4），上机测试后根据效价，用Storage Buffer 按比例稀释后，4℃避光保存，有效期一年。