第九章-环境监测中的微生物学方法.pptVIP

（二）大肠菌群的测定 常用多管发酵法与滤膜法： 发酵法： 又称多管发酵法或三步发酵法 初发酵（推测试验）：将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中（3倍或1倍乳糖液），经37oC培养24hr，观察产酸产气情况，以初步判断是否有大肠菌群存在。 2）平皿分离（证实试验） 水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。 将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基或远藤氏培养基上，37oC培养24hr，根据菌落特征，挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。 3） 复发酵试验（完成试验） 将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入1倍乳糖培养液中，经37oC培养24hr，产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。 产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、产气则记为阴性反应； 根据阳性管数量，查表求得水体大肠菌群的数量。 2 滤膜法 发酵法全部检测需要的时间较长，为缩短时间，可以采用滤膜法，其步骤为： 1）水样过滤：选用具有微孔的滤膜，灭菌后通过抽滤一定量的待测水样，将水中的细菌截留在无菌滤膜上； 2）培养：将滤膜有菌面朝上贴于特定的固体培养基平板上（伊红美兰培养基或远藤氏培养基），经37oC培养16hr~18hr； 3）结果观察： 培养16hr~18hr后，挑选深红色或紫红色、不带或带有金属光泽的菌落，或者淡红色、中心色较深的菌落