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- 2019-10-25 发布于江苏
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何谓PCR? ????简单的说,PCR就是利用DNA 聚合酶对特定基因做体外或 试管内?(In?Vitro)?的大量合成。基本上它是利用DNA聚合酶进行专一性的连锁复制.目前常用的技术,可以将一段基因复制为原来的一百亿至一千亿倍。? PCR的要素 ????基本的PCR须具备1.要被复制的DNA模板?(Template)?2.界定复制范围两端的引物(Primers).?3.DNA聚合酶?(Taq.?Polymearse)??4.合成的原料及水。PCR反应包括三个主要步骤,分别是 1).?Denaturation??2).?Annealing?of?primers,?and?3).?Extension?of?primers。?所谓?Denaturing乃是将DNA加热变性,?将双股的DNA加热后转为单股DNA以做为复制的模板.?而Annealing?则是令?Primers于一定的温度下附着于模板DNA两端。?最后在DNA聚合酶?(e.g.?Taq-polymerase)?的作用下进行引物的延长?(Extension?of?primers)及另一股的合成。
PCR的历史? ????PCR的发展可以说是从DNA合成酵素的发现缘起。DNA合成酵素最早于1955年发现?(DNA?polymerase?I),?而较具有实验价值及可得性的 Klenow?fragment?of??E.?Coli?则是于70年代的初期由Dr.?H.?Klenow?所发现,?但由于这个酵素是一种易被热所破坏之酵素,?因此不符合一连串的高温连锁反应所需。现今所使用的酵素?(简称?Taq?polymerase),?则是于1976年从热泉?Hot?spring中的细菌(Thermus?Aquaticus)?分离出来的。?它的特性就在于能耐高温,是一个很理想的酵素,但它被广泛运用则于80年代之后。PCR的原始雏形概念是类似基因修复复制?(DNA?repair?replication),它是于1971年由?Dr.?Kjell?Kleppe?提出。他发表第一个单纯且短暂性基因复制?(类似PCR前两个周期反应)?的实验。?而现今所发展出来的PCR则于1983由?Dr.?Kary?B.?Mullis发展出的,Dr.?Mullis当年服务于一家物科技研究公司?(Perkin- Elmer?Cetus?Corporation).?目前这家公司在PCR的相关仪器及原料上占有很大的巿场。Dr.Mullis?并于1985年与?Saiki?等人正式表了第一篇相关的论文。此后,PCR的运用一日千里,相关的论文发表质量可以说是令众多其它研究方法难望其项背。在?1989?年,Science?将PCR中的DNA合成酵素命名为当年的风云分子?(Molecule?of?the?year),而PCR本身则列为年度的重要科学发明产物。当然,它的原发明者更在往后获得诺贝尔的桂冠。? 影响PCR的因素? ????PCR是非常直接、简单又具有强大威力的技术。诚如一位当年参与PCR诞生的资深研究员Henry?Erlich所言”在分子生物学的领域中,只要拥有它,你便可以无照营业” (PCR?allows?people?to?practice?molecular?biology?without?a?liscence)。也因此,活用及慎用PCR是确保一定品质的必要条件。PCR本身虽然是一个单纯的实验技术,但是一个好的PCR反应及其产物则是受到很多因素的影响。这些因素色括
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