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免疫共沉淀 扬州大学 生物科学与技术学院 优点 相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态； 蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响； 可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。 缺点 可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质－蛋白质相互作用 两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而可能有第三者在中间起桥梁作用； 如用western blot检验，必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最后检测的抗体，若预测不正确，实验就得不到结果。 利用western blot 确定捕获蛋白 实验注意事项 （1）细胞裂解采用温和的裂解条件，不能破坏细胞内存在的所有蛋白质－蛋白质相互作用，多采用非离子变性剂（np40或triton x-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的，通过经验确定。不能用高浓度的变性剂（0.2 sds)，细胞裂解液中要加各种酶抑制剂，如商品化的cocktailer。 （2）使用明确的抗体，可以将几种抗体共同使用 （3）使用对照抗体： 单克隆抗体：正常小鼠的igg或另一类单抗 兔多克隆抗体：正常兔igg (4) 确保共沉淀的蛋白是由所加入的抗体沉淀得到的，而并非外源非特异蛋白，单克隆抗体的使用有助于避免污染的发生； (5) 要确