法医物证学《混合斑检》TBL教学.pptxVIP

第十七章 混合斑检验;;混合斑 (mixed stain or mixture) 是指 两名或两名以上个体的体液、分泌液混合形 成的斑痕。;;混合斑常出现在下列情况： ;咬痕拭子 可能含有咬者的口腔上皮细胞和被咬者的皮肤细胞 ;;混合斑的确证:检测精液成分及阴道成分确证;(二)阴道液的确证： № 细胞学检查 ：阴道上皮细胞（复层鳞状上皮细胞） ?HE染色：（典型）大而扁平、形态不规则、胞浆红染 ; ?嗜碘试验：斑痕沉淀涂片，干燥后+2滴Lugo’s碘液---2~3min镜检，呈红褐色或深黄褐色，（口腔上皮细胞不染色，可鉴别） ③阴道肽酶测定：（VP）是一种催化肽键水解的酶（ L-缬氨酸-L-亮氨酸） 仅存在女性生殖道分泌液中，与年龄、性活动、月经周期无关。 方法：淀粉凝胶电泳 注意：阳性检出率只有64%，故阴性结果不能否定阴道液存在。检出期限为7个月。;混合斑中精液成分的个人识别;（一）对比推断法 1、DNA分型——STR基因座分型 2、ABO血型测定（常用——中和试验） 用中和试验测定混合斑和受害人唾液的ABH物质及分泌状态，进行对比分析，可推测混合斑中精液的ABO血型。 若混合斑中精液血型与犯罪嫌疑人血型不同，则可否定犯罪嫌疑人；如相同，则不能否定。若受害者为非分泌型，则很容易从混合斑中判断犯罪嫌疑人的血型。 ; 被害人没有的血型物质可以认为是来自精斑 分泌型和非分泌型个体的体液中血型物质的含量无绝对的界线 ，凝集抑制的级数反映分泌型的强弱。 所有的分泌型个体的体液中都可以检测出H物质，只是O型分泌型的H物质含量最高，而A型、B型和AB型个体的A和B物质含量明显高于H。 能否检测出混合斑各个体的血型物质，还受混合比例等影响因素。在检测中注意多处取材，分析所有的检测结果，才有可能准确推定精液的血型。;（二）分离精液与阴道液组分进行检测——常染色体DNA分析 关键——获得纯净的精子细胞DNA 方法——差异裂解（两步抽提法) 原理：精子细胞的表面蛋白含有大量的二硫键，可以抵抗去垢剂SDS和蛋白酶K的消化，而其他组织的细胞膜、核膜则可以被这两种???质消化。 方法：第一步：检材+SDS+蛋白酶K+TES缓冲液 → 37℃水浴3h → 离心，上清（含阴道上皮细胞DNA），精子留在沉淀物中。 第二步：沉淀物+DTT（二硫苏糖醇）+SDS+蛋白酶K+TES缓冲液→ 56 ℃水浴过夜 → 离心，上清（含精子DNA）。 ;混合斑第一步消化后的上清液中含有阴道上皮细胞DNA，第二步消化液中含精子细胞的DNA，可分别进行DNA分型，并与受害者和犯罪嫌疑人比对，从而排除或认定犯罪嫌疑人。 注意： 实际操作前，应进行涂片检查，确定精子和阴道上皮细胞的比例，根据情况和经验对第一步消化的时间、温度、试剂浓度等做适当的调整；还可对第一步消化进行消化时间梯度的尝试。 ;（三）检测精液特有成分——Y染色体DNA分析 1 男性特有，Y-STR检测不受女性成分的干扰，不需分离精液成分和阴道液成分，两者比例为1/100—1/2000时仍可正确检出精子DNA，避免了两步消化过程，及操作过程中精子DNA的损失，提高了检出阳性率。 2 精子细胞比体细胞更稳定，保存25年的阴道式子Y-STR获得成功 3 灵敏度高，同时也适用无精子症或少精子症犯罪嫌疑人 4 可以推测犯罪嫌疑人的数目 → 强奸案。 ;;轮奸案混合斑检材的鉴定 差异提取DNA技术，无法分离不同个体的精子。常染色体DNA分型结果是多个男性个体的混合图谱，对确定犯罪嫌疑人有困难。 Y-STR在确定轮奸案件中犯罪嫌疑人数、排除或指控犯罪嫌疑人等方面均较常染色体STR标记有明显的实用价值，是轮奸案件中重要的检验内容。;多个体血液混合斑鉴定;ABO血型测定（筛查）;（2）常染色体基因座分析： STR分型，确定混合斑具有的等位基因再进行鉴定： a.确定混合血样中可能的个体数； b.确定混合型DNA图谱中个体组分的近似比例； c.推断混合型DNA样品基因型组合并与受害人或嫌疑人基因型比对 ;被害人