GB/T 13087-1991饲料中异硫氰酸酯的测定方法.pdf

中华人民共和国国家标准 饲料中异硫氮酸醋的测定方法 GB 13087一91 Method for determination of isothiocyanates in feeds ，主题内容与适用范困 本标准规定了配合饲料和菜籽饼粕中异硫氰酸醋的测定方法。 本标准适用于配合饲料(包括混合饲料)和菜籽取油后的饼粕中异硫氰酸醋的测定。 第一篇 气相色谱法 2 原理 配合饲料中存在的硫葡萄搪昔，在芥子酶作用下生成相应的异硫氰酸酷，用二氯甲烷提取后再用气 相色谱进行测定。 3试剂和溶液 除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。 3.1二氯甲烷或氯仿(GB 682). 3.2 丙酮(GB 686), 3.3 pH7缓冲液:市售或按下法配制。量取35. 3 mLO. 1 mol/L柠檬酸(C6He0cH20)溶液，置入200 mL 定容瓶中，用0. 2 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO,12H20,GB 1263)稀释至刻度，配制后检查pH值。 3.4无水硫酸钠。 15酶制剂:将白芥( Sinapis alba L.)种子((72 h内发芽率必须大于85 ，保存期不超过两年)粉碎 后，称取100 g，用300 mL丙酮(3.2)分10次脱脂，滤纸过滤，真空干燥脱脂白芥子粉，然后用400 mL水 分两次提取脱脂粉中的芥子酶，离心，取上层混悬液体，合并，于合并混悬液中加入400 mL丙酮(3.2)沉 淀芥子酶，弃去上清液，用丙酮(3.2)洗沉淀5次，离心，真空干燥下层沉淀物，研磨成粉状，装入密闭容器 中，低温保存备用，此制剂应不含异硫氰酸醋。 3.6丁基异硫氰酸酷内标溶液:配制0. 100 mg/mL丁基异硫氰酸酷CCH, (CH2 ),NCS〕二氯甲烷或氯 仿((3.1)溶液，贮于4C，如试样中异硫氰酸酷含量较低，可将上述溶液稀释，使内标丁基异硫氰酸醋峰面 积和试样中异硫氰酸酷峰面积相接近。 4 仪器、设备 4 . 3 4 2 4 1 气相色谱仪:具有氢焰检测器。 氮气钢瓶:其中氮气纯度为99.99000 微量注射器:5 pL, 4 4 分析天平:感量。.000 1 g. 国家技术监督局1991一07门6批准 1992一04一01实施 GB 13087一91 4. 5 实验室用样品粉碎机。 4.6 振荡器(往复，200次/min). 4.7 具塞锥形瓶，25 mLe 4. 8 离心机。 4.9 离心试管:10 ml,. 5试样制备 采集具有代表性的配合饲料样品，至少2 kg，四分法缩分至约250 g，磨碎，过1 mm孔筛，混匀，装入 密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。 6测定步获 6.1试样的酶解 称取约2. 2 g试样于具塞锥形瓶((4-7)中，精确到0. 001 g，加入5 mLpH7缓冲液((3.3),30 mg酶制 剂((3. 5),10 mL丁基异硫佩酸醋内标溶液(3.6)，用振荡器((4-6)振荡2h，将具塞锥形瓶(4-7)中内容物 转入离心试管((4-9)中，离心机((4-8)离心，用滴管吸取少量离心试管((4-9)下层有机相溶液，通过铺有少 量无水硫酸钠(3-4)层和脱脂棉的漏斗过滤，得澄清滤液备用。 6.2色谱条件 6.2-1色谱柱:玻璃，内径3 mm，长2 m, 6.2