漾濞大泡核桃病程相关蛋白10基因JsPR10￣1的克隆与表达.PDFVIP

植物科学学报　 ２０１４ꎬ３２(６):６１２~６１９ Ｐｌａｎｔ ＳｃｉｅｎｃｅＪｏｕｒｎａｌ － 　 　 ＤＯＩ:１０１１９１３/ ＰＳＪ２０９５ ０８３７２０１４６０６１２ 漾濞大泡核桃病程相关蛋白１０基因 ＪｓＰＲ１０￣１的克隆与表达分析 何 华ꎬ 陈朝银ꎬ 韩 青ꎬ 张南南ꎬ 葛 锋ꎬ 刘迪秋∗ (昆明理工大学生命科学与技术学院ꎬ 昆明６５０５００) 摘　 要:病程相关蛋白(ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎꎬＰＲ) １０ 的激活与积累在植物抗逆境胁迫中有非常重要的 作用ꎮ 根据漾濞大泡核桃(Ｊｕｇｌａｎｓ ｓｉｇｉｌｌａｔａ)编码 ＰＲ１０ 的ＥＳＴ (ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔａｇ)序列设计引物ꎬ 利用 快速扩增ｃＤＮＡ末端技术ꎬ 克隆得到ＰＲ１０基因的全长ｃＤＮＡ序列ꎬ 并命名为ＪｓＰＲ１０￣１ꎮ ＪｓＰＲ１０￣１全长ｃＤＮＡ 为７７６ ｂｐꎬ 含有４８３ ｂｐ的开放阅读框、 ７４ ｂｐ５′￣非编码区以及２１９ ｂｐ３′￣非编码区ꎬ 编码含有１６０个氨基酸的 蛋白质ꎮ 全长基因序列中含有１个 １２４ ｂｐ的内含子ꎮ ＪｓＰＲ１０￣１编码的蛋白质与栎树(Ｑｕｅｒｃｕｓ ｓｕｂｅｒ)、 欧洲山 毛榉(Ｆａｇｕｓ ｓｙｌｖａｔｉｃａ)以及欧洲板栗(Ｃａｓｔａｎｅａ ｓａｔｉｖａ)的ＰＲ１０相似性较高ꎬ 并且在ＰＲ１０ 的系统进化树中与双 子叶植物聚为一支ꎮ ｑＲＴ￣ＰＣＲ分析结果表明ꎬ 植物信号分子水杨酸、 茉莉酸、 乙烯以及过氧化氢处理均可诱导 ＪｓＰＲ１０￣１表达ꎮ 在接种胶孢炭疽菌(Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍ ｇｌｏｅｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ)后ꎬ ＪｓＰＲ１０￣１的表达量迅速上升并在接种 ８ ｈ时达到最大值ꎬ 表明ＪｓＰＲ１０￣１参与漾濞大泡核桃对胶孢炭疽菌的防卫反应ꎮ 本研究为揭示漾濞大泡核桃抗 性机制奠定了理论依据ꎮ 关键词:漾濞大泡核桃ꎻ 病程相关蛋白１０ꎻ 基因克隆ꎻ 胶孢炭疽菌ꎻ 防卫反应 中图分类号:Ｑ７８　 　 　 　 　 文献标识码:Ａ　 　 　 　 　 文章编号:２０９５￣０８３７(２０１４)０６￣０６１２￣０８ Ｃｌｏｎｉｎｇ ａｎｄ ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａ Ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ￣ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ １０ Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｊｕｇｌａｎｓ ｓｉｇｉｌｌａｔａ ＨＥ ＨｕａꎬＣＨＥＮＣｈａｏ￣ＹｉｎꎬＨＡＮＱｉｎｇꎬＺＨＡＮＧ Ｎａｎ￣ＮａｎꎬＧＥ ＦｅｎｇꎬＬＩＵ Ｄｉ￣Ｑｉｕ∗ (Ｆａｃｕｌｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅａｎｄ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ ＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬＫｕｎｍｉｎｇ６５０５００ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ (ＰＲ) １０ ｐｌａｙ ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｇａｉｎｓｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ. Ｂａｓｅｄ ｏｎ ａ Ｊｕｇｌａｎｓ ｓｉｇｉｌｌａｔａ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｔａｇ (ＥＳＴ) ｅｎｃｏｄｉｎｇ ＰＲ１０ꎬ ｇｅｎｅ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ａｎｄ ｕｓｅｄ ｔｏ ａｍｐｌｉｆｙｔｈｅｆｕｌｌ￣ｌｅｎｇｔｈｃＤＮＡｏｆ ａｎｏｖｅｌＰＲ１０ｇｅｎｅ ｂｙ ｒａｐｉｄａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆ ｃＤＮＡ ｅｎｄｓ (ＲＡＣＥ).Ｔｈｉｓ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｎａｍｅｄ ａｓ ＪｓＰＲ１０￣１. ＪｓＰＲ１０￣１ｗａｓ ７７６ ｂｐ ｉｎ ｌｅｎｇｔｈ ｗｉｔｈ ａｎ ｏｐｅｎ ｒｅａｄｉｎｇ ｆｒａｍｅ (ＯＲＦ) ｏｆ ４８３ ｂｐꎬａ ５′￣ｕｎｔｒａｎｓｌａｔｅｄ ｒｅｇｉｏｎ (ＵＴＲ) ｏｆ ７４ ｂｐꎬａｎｄ ａ ３′￣ＵＴＲ ｏｆ ２１９ ｂｐꎬａｎｄ ｔｈｅ ＯＲＦｅｎｃｏｄｅｄ ａ ｐｒｏｔｅｉｎ