动物细胞培养生物制药i.pptxVIP

先看看人体的一些细胞;树突细胞;骨细胞;成骨细胞;胶质细胞;视网膜视杆细胞;黑色素细胞;本节主要内容;本节关键问题;（一）动物细胞培养的特点;3 应用领域;4 特点;;A 成纤维细胞型细胞;B 上皮型细胞;C 游走型细胞;D 多形型细胞;接触性抑制(Contact inhibition) 是某些动物细胞体外培养的生长特性之一。是指由于细胞相互接触而抑制细胞运动性的现象（图11.2）。由于这个特性，正常细胞并不会相互重叠，而是呈单层细胞生长。 密度抑制(Density inhibition) 细胞接触汇合成片后，只要营养充分，细胞仍能进行增??分裂。但是当细胞密度达到一定程度后，营养相对缺乏，代谢产物增多，发生密度抑制现象;（二）动物细胞培养的条件;（1）天然培养基;;;（2）合成培养基;例如;（3）无血清培养基;无血清培养基;2 其他溶液;（2）培养基pH调整液. 大部分合成培养液都呈微酸性。 常用pH调整液有：3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES液等。 注：HEPES是一种非离子两性缓冲液，其在pH 7.2 - 7.4范围内具有较好的缓冲能力： 化学名：2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid。 中文名：4-羟乙基哌嗪乙硫磺酸。 分子式：C8H18N2O4S;（3）细胞消化液;（4）抗生素溶液;3 培养条件;4 培养工具;;;?同微生物、植物细胞培养不同，动物细胞培养的培养基与其他溶液不能经受高温灭菌，多采用过滤除菌（例如支原体污染），因此需要特殊的滤器。 ?? 支原体（mycoplasma）：又称霉形体，是一种能够自我复制的最小的原核微生物，没有细胞壁，许多常见的抗生素（如青霉素）对支原体是无效的。四环素类、大环内酯类等作用于核蛋白体的抗生素有抑制作用。大小为0.2-0.3μm，可通过一般滤菌器，40纳米过滤技术可去除。;;（三）动物细胞培养方式;（1）贴壁材料;（2）贴附生长过程;;2 固定化培养;3 悬浮培养;（四）动物细胞小规模培养;2 培养板培养法（微量培养法）;3 灌注小室培养法;4 转管培养法;（五）动物细胞原代培养;1 组织块原代培养;2 细胞原代培养;原代培养示意图;（六）动物细胞传代培养;1 传代培养方法;酶消化的传代方法;2 动物细胞培养的一般过程;;细胞培养过程分析;1.细胞形态检查及活力分析：倒置显微镜下观察；四唑盐（MTT）法可以对细胞活力进行分析（活细胞的线粒体脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物甲暨（Formazan)并沉淀在细胞中）。 2.pH及污染检查：含血清的新鲜培养液呈桃红色，pH在7.2～7.4之间。CO2的积累使培养液pH下降。当超出缓冲范围时，培养液变黄，需3～4天更换一次培养液。CO2培养箱能自动控制5%的CO2含量。细菌污染时培养液变浑浊；支原体易透过滤器，污染不易被发现。;讨论与总结;视频：动物细胞培养技术;下节课内容