牙鲆碱性磷酸酶基因5＇调控区的克隆及其功能检测.pdf

生物技术通报 年第 期 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2008 2 牙鲆碱性磷酸酶基因5调控区的克隆及其功能检测 施志仪 顾一峰 陈晓武 胡燕林 (上海水产大学生物技术研究中心,上海 ) 200090 摘 要: 通过基因组步移的方法扩增出一段 的牙鲆碱性磷酸酶基因 调控区序列,在线软件分析表明 调 924bp 5 5 控区内可能含有 、 、 、 、 、 、 、 、 、 等转录因子结合位点。采用 GKLFOctCREBE2FCEBPGATA-1Pitx-1Pit1RARE/TREAP4 DNA 重组的方法,将克隆得到的 调控区片段插入启动子缺失的增强型绿色荧光蛋白表达载体 中,构建重组表达载 5 pEGFP-1 体pEGFP-JFALP。重组载体瞬时转染COS-7细胞,在倒置荧光显微镜下可以检测到绿色荧光信号,且荧光信号随着时间 的延长而增强。结果表明本实验克隆的牙鲆碱性磷酸酶基因 调控区具有一定的启动子活性,为今后进一步研究碱性磷 5 酸酶基因表达调控的分子机制奠定基础。 关键词: 碱性磷酸酶 基因 调控区 克隆 功能 5 CloningandFunctionDetectionof5RegulationRegionof AlkalinePhosphatasefrom JapaneseFlounder (Paralichthysolivaceus) ShiZhiyiGuYifeng ChenXiaowu HuYanlin ( , , ) ResearchCenterofBiotechnologyShanghaiFisheriesUniversityShanghai200090 : Abstract A924bpfragmentof5regulationregionofJapaneseflounderalkalinephosphatasegenewasamplified bymethodsofGenomeWalker.Theonlinesoftwareanalysisshowedthat5regulationregioncontainedputative , , , , , , , , , transcriptionfactorrecognitionsitesincludingGKLFOctCREBE2FCEBPGATA-1Pitx-1Pit1RARE/TREAP4etc.