六、脲酶米氏常数简易测定2010.pptVIP

生物技术专业系统实验（四）  —酶（蛋白质）工程实验VI 六、脲酶米氏常数（Km值）简易测定 1.目的意义 2.实验原理 3.仪器设备 4.实验方法 5.实验报告 6.思考题 1.目的意义 1913年，由Michaelis L.和Menten M.在前人研究的基础上提出的米氏方程（Michaelis-Menten Equation）是酶学中表示一个酶促反应的起始速度V与底物浓度[S]关系的方程。 1925年，经过Briggs和Haldane修正后，提出更有普遍意义的酶促反应速度方程，如下所示： 其中，V为酶促反应速度；Vmax为最大反应反应速度（与V的单位相同, mol·L-1·min-1）； [S]为底物浓度（mol·L-1）；Km为米氏常数，是酶促反应速度V为最大酶促反应速度值一半时的底物浓度,即V = 1/2Vmax时, Km = [S] 。 在酶促反应中，底物在低浓度情况下，反应相对于底物是一级反应（first order reaction）；而当底物浓度处于中间范围时，反应（相对于底物）是混合级反应（mixed order reaction）；当底物浓度增加时，反应由一级反应向零级反应（zero order reaction）过渡；当底物浓度[S]逐渐增大时，速度V相对于[S]的曲线为一双曲线。