第四章 目的基因的转化及其原理.ppt

3. T-DNA整合的遗传效应 T-DNA插入的遗传特性： (1)T-DNA的插入不引起植物DNA大的重排。但多数插入会导致靶位点处小的缺失，缺失多至79个核苷酸。 (2)另一个常见的结果是，在T-DNA／植物DNA连接处，会有几个至33个核苷酸的“填充”DNA（Filler DNA）存在，这些“填充”DNA的序列与靠近连接处的植物DNA序列相似。 (3)在植物靶位处不要求有特异的序列，但若在T-DNA两端和植物靶位处之间有一段短序列（5～10b）同源，则可以在整合中起作用。 * PPT课件 五、农杆菌Ti质粒的改造及载体构建 1、Ti质粒的改造及卸甲载体构建 2、中间载体/表达载体的构建 3、植物基因转化载体系统的构建 * PPT课件 1、Ti质粒的改造及卸甲载体构建 野生型Ti质粒直接作为植物基因工程载体，存在如下障碍：①Ti质粒分子量过大，一般在160～240kb，基因工程中难以操作； ②大型的野生Ti质粒上分布着各种限制酶的多个切点，..难以找到可利用的单一限制性内切酶位点，不能通过体外DNA重组技术直接向野生型Ti质粒导入外源基因； ③T-DNA区内含有许多编码基因，其中onc基因产物干扰宿主植物中内源激素的平衡，转化细胞长成肿瘤，阻碍细胞的分化和植株的再生； ④Ti质粒不能在大肠杆菌中复制, 即使得到重组质粒，也只能在农杆菌中