HPLC中的手性固定相.pptVIP

HPLC中的手性固定相 概述 较之GC、SFC、TLC、CE、CEC，HPLC是最为重要的手段，尤其是在制备级别。 过去20年，是HPLC手性固定相快速发展的时期。迄今，已经商品化的HPLC手性固定相约有110余种。 通常，手性固定相的制备都较为一致，即选择一个单一对映体固定化在色谱基质上，当被分析物通过时，因为结合后的稳定性或保留性的差异，而实现分离。 概述 手性识别与对映体的分离是自然界及技术领域的基本现象。手性固定相的分子识别机理与对应的选择性结构，一直受到研究者的关注。但是，其内在的分子机理至今仍未得到阐明。 三点作用模型，仍然是解释分子识别机理时使用最多的理论。 概述 三点作用原理在理论和应用上也有了一些新的观念，如：具有类似于受体选择性的手性固定相，可提供更为有力的分子水平上的主-客体联合相互作用；对来源于自然界的手性选择固定相，其手性识别能力大多来源于氢键，不仅涉及到分子结构的问题，相关氢键的能量信息也起重要作用。 概述 常见商业来源的HPLC中手性固定相的主要结构、识别机理、限制与应用，将是本节主要内容。 经典的手性固定相通常被分为配基交换、环糊精、Pirkle型、合成多聚物、多糖、蛋白质、大环抗生素和冠醚类。除此之外，还有许多其他的具有潜在发展前景的手性固定相，但还未达到前述的商业化程度，如环果聚糖、金属复合物、硼包含物等。 色谱手性分离技术的合理设计，以及基于高通量筛选与计算化学的新技术在HPLC手性固定相研制中，极有可能成为未来发展的方向。 经典手性固定相 现有的经典手性固定相，已可满足小分子药物分析领域内的多数手性分离的需要，主要包括药物分析与对映体拆分制备等。 根据手性固定相的不同来源，可以分为自然来源的、半合成的、全合成等3大类。 经典手性固定相 配体交换型手性固定相： 1960年代末，最早采用色谱方法对消旋体进行拆分，即为使用一种配体交换型的手性固定相分离氨基酸对映体。 将脯氨酸固定化在聚苯乙烯载体上，在流动相中加入Cu（II），由于脯氨酸、金属离子及被分析的氨基酸间非对映的三重复合结构，被分析氨基酸被吸附在中心离子的配位层。 通过对该手性分离现象的研究，后来陆续研制出基于硅胶载体的固定相，以及连接其他类型手性固定相的多聚物类型的色谱柱。由环氧树脂作用的（L）脯氨酸结合硅胶是最早上市的手性键合固定相（Chiral Procu，Serva，Heidelberg，Germany）。 经典手性固定相 配体交换型手性固定相： 经典手性固定相 配体交换型手性固定相： 配体结合型的手性固定相主要用于生物相关性物质的手性分离，如氨基酸和羟基酸。只有那些具有2个或以上可供螯合的基团的对映体，才能在这一类固定相上分离。 常见的金属离子，有Cu（II）、Zn（II）、Ni（II）等，其中以Cu（II）为多用，Zn（II）分离含羟基的氨基酸效果最好。 如分子结构中含有芳香基团或杂原子时，分离情况会有所不同。 经典手性固定相 环糊精型手性固定相： 环糊精从1970年代开始被尝试用于手性分离。 环糊精是一类由环形低聚糖构成的杯状化合物，通常由淀粉经环糊精转糖基酶催化得来，含有6（α-环糊精）、7（β-环糊精）或8（γ-环糊精）个经α-（1,4）-糖苷键连接而得到的吡喃型葡萄糖单位。 环糊精杯状结构的腔内部，不含有羟基，呈疏水性，而杯状的外沿则是亲水性的。 经典手性固定相 环糊精型手性固定相： 环糊精类的手性识别能力，不仅与外沿的亲水性基团有关，而且与被分析物的疏水性基团（尤其是芳香疏水基团）被杯腔包含有关。 在环糊精杯腔外沿的C-2、C-3上的羟基，差异性产生氢键、偶极-偶极作用，也是手性识别的因素。通过对羟基进行化学改性，可以增强环糊精的手性分离能力。 β-环糊精是HPLC中使用最多的手性分离物质。 经典手性固定相 环糊精型手性固定相： 经典手性固定相 环糊精型手性固定相： 大多数环糊精手性固定相只适用于反相色谱，分析极性有机化合物。 部分改性后的环糊精手性固定相可以被用于正相色谱，如Cyclobond I RN或SN，因其可作为π电子供体，具有π电子接受能力的被分析物可以正相色谱的方式保留在这种手性固定相上。 经典手性固定相 环糊精型手性固定相： 多类化合物通过环糊精得以成功完成手性分离，如β-阻断剂、生物碱、羧酸及其他中性分子等。 β-阻断剂类药物，可以直接在天然β-环糊精或γ-环糊精固定相上分离。 将环糊精进行磺基化后，可以利用其多重相互作用（如疏水性或静电力），分离中性物质、阴离子或阳离子，该类手性固定相在生物医药领域的应用非常广泛。 氨基甲酰化或二醇化的环糊精固定相，用于分离环己烯巴比妥、氯苯吡胺（扑尔敏）等 经典手性固定相 Pirkle型手性固定相： Pirkle型手性固定相最早于1970年代末由Pirk