SN／T 1357-2004_茨城病免疫琼脂扩散试验方法.pdfVIP

　 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 ／ — 犛犖犜１３５７ ２００４ 茨城病免疫琼脂扩散试验方法 犘狉狅狋狅犮狅犾狅犳犃犌犐犇犳狅狉犻犫犪狉犪犽犻犱犻狊犲犪狊犲 ㅤㅤㅤㅤ ２００４０６０１发布 ２００４１２０１实施 中 华 人 民 共 和 国 发 布 国家质量监督检验检疫总局 ／ — 犛犖犜１３５７ ２００４ 茨城病免疫琼脂扩散试验方法 １ 范围 　 本标准规定了牛茨城病免疫琼脂扩散试验方法。 本标准适用于进出境牛茨城病的检疫。 ２ 材料 　 ２．１ 试剂 　 琼脂糖（电泳用）、 生理盐水。 ２．１．１ ０．９％ 　 ２．１．２ 抗原、标准阳性血清。 　 ２．２ 器材 　 ２．２．１ 吸管、量筒、三角烧瓶、直径为 ９０ｍｍ平皿。 　 ２．２．２ 水平台、天平、金属打孔器、可调式微量移液器及吸头。 　 ２．２．３ 模板纸：中间一个孔周围六个孔，孔径为 ４ｍｍ；孔间距（边缘）均为 ３ｍｍ。 　 ２．３ 被检血清 　 无菌采血，分离血清， 暂存或冰冻保存。 ４℃ ３ 操作方法 ㅤㅤㅤㅤ 　 ３．１ 琼脂平板的制备 　 取琼脂糖 ， 生理盐水 ，加入三角烧瓶，在水浴中充分煮沸融化，或 高 １ ０．９％ １００ｍＬ １１５℃１０ｍｉｎ ｇ 压，冷却至 ５６℃左右，将洁净干热灭菌的平皿置于水平台上，每个平皿加 ２０ｍＬ（厚度 ３ｍｍ），加盖凝固 后，把平皿倒置，防止水分蒸发，放 冷藏保存。 ４℃ ３．２ 打孔 　 反应孔现用现打，从冰箱中取出琼脂凝胶板，放在模板纸上，照图案在固定位置上，立即用金属打孔 器打孔，将孔中的琼脂柱用针头轻轻挑出或吸出，勿伤边缘。 ３．３ 加样 　 制好孔型的平皿写上日期及编号，用可调式微量移液器加样。使用图 时，“”孔加抗原，使用图 １ Ｇ ２ 时，在中央孔加抗原，“ ”孔加标准阳性血清，其他孔均加被检血清。每孔均以加满不溢出为度，每加一 ＋ 个样品应换一个吸头。然后将琼脂板放入有湿纱布的带盖湿盒内，置室温（２０℃ ２５℃）使之扩散和 ～ 反应。 １ ／ — 犛犖犜１３５７ ２００４ 图 １