MDA含量的测定SOP.docVIP

主要目的： ——为了测定样品中的MDA含量，作为机体内脂质过氧化的程度的一个指标。 主要原理： ——测定原理为过氧化脂质降解产物中的丙二醛可与硫代巴比妥酸（TBA）缩合，形成红色产物，在532 nm 波长下有最大吸收峰[100]。用酶标仪在532 nm处测定吸光度（OD值），计算样品浓度。因底物为硫代巴比妥酸，所以此法称为TBA法。 实验室签章 试剂 ——无水乙醇（分析纯） ——硫代巴比妥酸 ——冰醋酸 ——双蒸水 ——丙二醛（MDA）测定试剂盒（南京建成生物研究所） 仪器设备 ——96孔酶标板 ——UV-Vis可见多功能酶标仪 ——旋涡混匀器 ——水浴锅 ——移液枪及相应量程枪头 实验方法 根据试剂盒说明书具体操作步骤如下： 向标准管0.1 mL标准品，空白管加入0.1 mL无水乙醇，测试管和对照管加入稀释后的血清或组织上清液0.1 mL，然后各管中再分别加入0.1 mL试剂一，摇动几下试管架晃匀，向各管中分别加入3 mL的试剂二和1ml的试剂三，同时只向对照管中加入50%冰醋酸1 mL。 旋涡混匀器混匀，试管口用保险薄膜扎紧，用针头刺一小孔，95℃水浴40分钟，取出后流水冷却，然后4000转/分，1cm光径，双蒸水调零，测定各管吸光度值。 血清中MDA含量计算公式 MDA 含量（nmol/mL）×标品浓度×样本前稀释倍数 组织中MDA含量计算公式 MDA 含量（nmol/mgprot）×标品浓度÷样品蛋白浓度（mgprot/mL） Lu T C, Ko Y Z, Huang H W, et al. Analgesic and anti-inflammatory activities of aqueous extract from Glycine tomentella root in mice[J]. Journal of ethnopharmacology, 2007, 113(1): 142-148.