SN／T 2071-2008_亚洲柑桔黄龙病菌检疫鉴定方法.pdf

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 ／ — 犛犖犜２０７１ ２００８ 亚洲柑桔黄龙病菌检疫鉴定方法 犐犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳犆犪狀犱犻犱犪狋狌狊犾犻犫犲狉狅犫犪犮狋犲狉犪狊犻犪狋犻犮狌犿 ㅤㅤㅤㅤ行业标准 ２００８０４２９发布 ２００８１１０１实施 中 华 人 民 共 和 国 发 布 国家质量监督检验检疫总局 ／ — 犛犖犜２０７１ ２００８ 亚洲柑桔黄龙病菌检疫鉴定方法 １ 范围 　 本标准规定了进出境植物检疫中亚洲柑桔黄龙病菌的检疫和鉴定方法。 本标准适用于进出境柑桔种子、苗木等寄主繁殖材料和柑桔水果类等植物产品中亚洲柑桔黄龙病 菌的检疫和鉴定。 ２ 原理 　 ２．１ 亚洲柑桔黄龙病菌分类地位 　 亚洲柑桔黄龙病菌（ ）属于薄壁菌门（ ）韧皮部杆菌属 犆犪狀犱犻犱犪狋狌狊犾犻犫犲狉狅犫犪犮狋犲狉犪狊犻犪狋犻犮狌犿 Ｇｒａｃｉｌｉｃｕｔｅｓ （ ）亚洲型细菌。相关资料参见附录 。 犔犻犫犲狉狅犫犪犮狋犲狉 Ａ ２．２ 检疫鉴定原理 　 利用多聚酶链式反应（ｏｌｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）技术，进行亚洲柑桔黄龙病的检疫鉴定。ＰＣＲ产 ｐ ｙ 物进行测序和 ＢＬＡＳＴ，用于区分亚洲柑桔黄龙病菌和其他两种柑桔黄龙病菌。 ３ 仪器 　 ３．１ 研体。 　 ３．２ 白瓷盘。 　 ㅤㅤㅤㅤ行业标准 ３．３ Ｈ计。 　ｐ 管、 管（ ）。 ３．４ ＰＣＲ Ｅ ｅｎｄｏｒｆ １．５ｍＬ 　 ｐｐ 移液枪（ 可调、 可调、 可调、 可调）。 ３．５ １０００ Ｌ ２００ Ｌ ２０ Ｌ ２．５ Ｌ 　 μ μ μ μ ３．６ 恒温水浴锅或恒温培养箱。 　 ３．７ 分析电子天平。 　 ３．８ 低温冷冻超速离心机、低速离心机。 　 ３．９ ＰＣＲ扩增仪。 　 ３．１０ 电泳仪。 　 ３．１１ 凝胶成像仪。 　 ３．１２ 低温冰箱。 　 ３．１３ 高压灭菌锅。 　 ３．１４ 超净工作台。 　 ４ 试剂药品 　 ／ 的 。 ４．１ ５０ｍｍｏｌＬ ＴｒｉｓＨＣｌ 　 ／ （Ｈ８．０）。 ４．２ １０ｍｍｏｌＬＥＤＴＡ 　 ｐ ／ 氢氧化钠 。 ４．３ ０．２ｍｏｌＬ ＋１％ＳＤＳ 　 ４．４ ０．５ｍＬ的乙酸钠（Ｈ４．８）。 　 ｐ ４．５ 液氮。 　 无水乙醇、双