综合化学实验-化学生物学实验.pptVIP

综合化学实验-化学生物学实验一、四 多酚氧化酶的粗提、蛋白质含量、催化活性测定及电泳分析 一、实验目的 在化学生物学研究中，蛋白质及酶是其重要的研究目标，特别是设计合成酶的抑制剂或激活剂，活性测定一定需要纯的酶制剂。 另外在化学遗传学或化学蛋白质组学研究中，当发现某一种小分子化合物在细胞生化途径中起作用后，也需要将能够与小分子化合物结合的蛋白质分离提取出来，再经过多种方法进行鉴定。 所以，蛋白质和酶的分离纯化及电泳分析等是化学生物学研究中一个极其重要的技术。 本实验选取马铃薯、番薯、蘑菇、茄子为实验材料，通过组织细胞破碎匀浆、过滤、离心、硫酸铵沉淀等步骤获得多酚氧化酶的粗酶液，对粗酶催化邻苯二酚、L-多巴的活性以及同工酶、分子量等进行测试。 通过本项实验，学习和了解蛋白质的提取、分离的基本原理和方法，掌握蛋白质含量测定方法、多酚氧化酶活性的测定方法，电泳技术测定同工酶和分子量的方法，掌握相关仪器设备的操作使用。 所提取的粗酶样品可作为实验三、实验四、实验五、实验六的材料。 （一）多酚氧化酶 多酚氧化酶(polyphenoloxidase，PPO，EC.1.10.3.1)是植物体内普遍存在的一类铜结合酶。它早在1895年就被发现，直至1937年才被分离得到。随着研究的深入，它被分为单酚单氧化酶(酪氨酸酶，EC.1.14.18.1)、双酚氧化酶(儿茶酚氧化酶，EC.1.10.3.2