高效液相色谱法仪器基本结构（课件）.pptVIP

高效液相色谱法仪器基本结构 4）安培检测器 由恒电位仪和一薄层反应池（体积为1~5?L）组成。如图。 接参比电极 和对电极 接色谱柱 Teflon 塑料块 1 cm 工作电极 (Pt, Au, 碳糊) 高效液相色谱法仪器基本结构 该检测器是利用待测物流入反应池时在工作电极表面发生氧化或还原反应，两电极间就有电流通过，此电流大小与待测物浓度成正比。 采用安培检测器时，流动相必须含有电解质，且呈化学惰性。它最适于与反相色谱匹配。但此检测器只能检测具有电活性的物质。 高效液相色谱法仪器基本结构 5）电导检测器 电导检测器主要用于离子色谱的检测。 其原理是基于待测物在一些介质中电离后所产生的电导（电阻的倒数）变化来测量电离物质的含量。 电导检测器的主要部件是电导池。其响应受温度影响较大，因此需要将电导池置于恒温箱中。另外，当pH7时，该检测器不够灵敏。 高效液相色谱法仪器基本结构 其它检测器还包括：MS、IR、Evaporative light scattering detector(光散射)、极谱等。 情境七：高效液相色谱对微量组分分析 任务三：认识高效液相色谱仪 知识点：高效液相色谱法仪器基本结构 课程：仪器分析 高效液相色谱法仪器基本结构 1）贮液器：1-2L的玻璃瓶，配有溶剂过滤器(Ni合金)，其孔很约2 ?m，可防止颗粒物进入泵内。 2）脱气：超声波脱气或真空加热脱气。溶剂通过脱气器中的脱气膜，相对分子量小的气体透过膜从溶剂中除去（气泡会影响检测）。 高效液相色谱法仪器基本结构 3）高压泵： 对输液泵的要求：密封性好、输液流量稳定无脉动、可调范围宽、耐腐蚀。 输液泵种类：恒压型和恒流型。 高效液相色谱法仪器基本结构 恒压泵(类似于风箱):可迅速获得高压，适于柱的匀浆填充。但因泵腔体积大，在往复推动时，会引起脉动，且输出流量随色谱系统阻力（主要是柱填充物）变化而变化，现已较少使用。 高效液相色谱法仪器基本结构 恒流泵: 溶剂流量恒定，与柱填充情况无关，使用较多。有机械注射式和机械往复式两种。应用最多的是机械往复式恒流泵(见下图。每分钟往复25~100次，因此脉动小。对流量变化敏感的检测器也会有噪声干扰，此时可连接一脉动阻尼器)。 高效液相色谱法仪器基本结构 马达 往复式拉动 密封 溶剂 球阀 脉动阻 尼器 到色谱柱 机械往复柱塞泵示意图 高效液相色谱法仪器基本结构 4）梯度淋洗装置 在分离过程中逐渐改变流动相组成的装置。如果只有一个泵，可采用低压混合设计（将两种或以上的溶剂按一定比例混合，再由高压泵输出）；如果有两个或以上泵，调节各自的流量，在高压下混合。 高效液相色谱法仪器基本结构 2. 进样系统 与GC相比，HPLC柱要短得多，因此由于柱本身所产生的峰形展宽相对要小些。即，HPLC的展宽多因一些柱外因素引起。这些因素包括：进样系统、连接管道及检测器的死体积。进样装置包括两种。 高效液相色谱法仪器基本结构 1）隔膜注射进样：使用微量注射器进样。装置简单、死体积小。但进样量小且重现性差。 高效液相色谱法仪器基本结构 2）高压进样阀：目前最常用的为六通阀。由于进样量可由样品管控制，因此进样准确，重复性好，如图。 装入样品 出口 进样 采样环 泵入溶剂 进色谱柱 高效液相色谱法仪器基本结构 3. 色谱柱 1）对色谱柱的要求：内壁光滑的优质不锈钢柱，柱接头的死体积尽可能小。柱长多为10~30cm，内径为4~5mm(尺寸排阻色谱柱常大于5mm，制备色谱柱内径更大)； 高效液相色谱法仪器基本结构 4. 检测器 液相色谱检测器包括紫外吸收、荧光发射、示差折光和安培检测器等。 高效液相色谱法仪器基本结构 1）紫外检测器 其检测原理和UV-Vis方法一样。只是此时所采用的吸收池为微量吸收池，通常其光程为2-10mm, 体积约为1~10 ?L。 石英窗 接色谱柱 UV 光电倍增管 废液 高效液相色谱法仪器基本结构 HPLC分析中，约有80%的物质可以在254 nm或280nm处产生紫外吸收。因此该类检测器应用很广。