原创力文档- 1、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。。
- 2、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 3、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 4、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 5、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 6、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 7、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
1152
[基金项目]国家科技支撑计划(2008BAI66B08
[作者简介]胡广宏,男,医学生物工程师,主要从事病毒性疫苗的研究工作。E-mail :zhongkuang333@163．com 。[通讯作者]周旭,女,研究员,研究方向为病毒性疫苗的研制。E-mail :kathzhou@sina．com 。
·实验研究·
SYBR-Green 实时定量PCR 用于Vero 宿主细胞
DNA 残留量的检测
胡广宏1,寇桂英1,包红1,余黎1,周旭
2
(1兰州生物制品研究所有限责任公司,兰州730046;2上海生物制品研究所有限责任公司,上海200052
[摘要]目的:建立基于SYBR-Green 荧光染料实时定量PCR 检测Vero 宿主细胞DNA 残留量的方法。方法:提取Vero 细胞基因组DNA ,设计细胞基因组高度重复顺序AGMr (HindIII -1基因片段的特异性引物,通过PCR 扩增AGMr (HindIII -1序列中一段特异性cDNA 片段,克隆至pGEM-T Vector ,重组质粒经酶切及测序鉴定合格后命名为pGEM-T /AGMr (HindIII -1-S 。结果:使用重组质粒和细胞基因组DNA 分别作为检测标准品,均取得了良好的结果,其检测灵敏度分别达到了0．03fg ·μL －1和0．03pg ·μL －1。结论:SYBR-
Green 实时定量PCR 可用于Vero 宿主细胞DNA 残留量的准确定量。
[关键词]实时定量;Vero 细胞;细胞基因组DNA ;重组质粒;残余DNA [中图分类号]R186
[文献标志码]A
[文章编号]1003－3734(201210－1152－05
Detection of residual Vero cell DNA by SYBR-Green real-time PCR
HU Guang-hong 1,KOU Gui-ying 1,BAO Hong 1,YU Li 1,ZHOU Xu 2
(1Lanzhou Institute of Biological Products ,Lanzhou 730046,China ;2Shanghai Institute of
Biological Products ,Shanghai 200052,China
[Abstract ]Objective :To establish SYBR-Green real-time PCR to detect the residual Vero cell DNA．Methods :Extracted Vero cell genomic DNA ;designed the long tandem repeat sequence (LTR gene specific primer and obtained the cDNA of AGMr (HindIII -1fragment．Clone the long tandem repeat sequence (LTR of genomic DNA of Vero cells to pGEM-T Vector ,insert-positive clones of pGEM-T /AGMr (HindIII -1-S were obtained by re-striction analysis and sequencing．Results :Good results were obtained when using pGEM-T /AGMr (HindIII -1-S and Vero cell genomic DNA as standard Respectively．The sensitivity of the developed quantitative PCR method was 0．3fg and 300fg respectively．Conclusion :SYBR-Green real-time PCR method might be used for quantitation of residual Vero cell DNA in vaccine．
[Key words ]real-time quantitative ;Vero cell ;genemic DNA ;recombinant plasmid ;residual DNA Vero 细胞广泛应用于多种疫苗的生产,作为传代细胞,其风险在于细胞残余DNA 具有潜在的致瘤性。因此,建立准确定量制品中细胞DNA 残留量的
方法对于疫苗安全性质控至关重要。目前,WHO 推荐的标准是每剂量制品中的终DNA 含量必须小于10ng ,美国FDA 建议使用检测灵敏度达到10pg 的检
文档评论（0）