《SNT 1106-2002 橡胶南美叶疫病菌检疫鉴定方法》.pdf

橡胶南美叶疫病菌检疫鉴定方法 Methods for the quarantine and identification of south american leaf blight [Microcylus ulei (P.Henn.)Von Arx] in rubber tree SN ／T 1106— 2002 前 言 橡胶南美叶疫病是我国进境植物检疫危险性病害。为了防止该病菌随寄主传人我国，需正确掌握橡胶南美叶疫病菌的检疫鉴定方法。 本标准在制定过程中，分析了国内外有关资料，总结了多年来植物检疫经验，根据橡胶南美叶疫病菌的形态学、生物学特性及植物病理学原理， 确定各项鉴定技术指标。 本标准给出橡胶南美叶疫病菌的有性态和无性态的形态特征，以及在寄主上所表现的病征和病状，鉴定时可以综合采取有性态和无性态的形态特 征，或者其中的一个世代的形态特征作为鉴定依据。 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国厦门出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：林石明、余芳平、陈勇。 本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 1 范围 本标准规定了进境植物检疫中橡胶南美叶疫病菌的检疫鉴定方法。 本标准适用于进境三叶橡胶属(Hevea spp.)植物的芽条、芽穗、蒴果等繁殖材料的橡胶南美叶疫病菌的检疫鉴定。 2 原理 橡胶南美叶疫病菌是活体营养真菌，可以侵染三叶橡胶的叶片、枝条、茎杆、花序、蒴果，造成橡胶树的持续落叶。该病菌有3种类型的繁殖 体，即子囊孢子、器孢子和分生孢子。该病菌可依据其极具扭曲的无性态的分生孢子特征，有性态的形态特征和生物学特征，以及在三叶橡胶属植物 上的症状特征进行鉴定。 3 仪器、试剂 3.1 手持式扩大镜。 3.2 双目解剖镜(10× ～50× )。 3.3 显微镜(100× ～1 000× )。 3.4 切片机。 3.5 小器具和器皿：刀片、解剖刀、解剖剪、铗子、记号笔、酒精灯或煤气灯、纱布、烧杯、搪瓷杯、移植接种针、移植环、培养皿、烧杯、三角 瓶、玻片、盖玻片、铝铂纸、Parafilm膜等。 3.6 超净工作台。 3.7 乳酚油：由苯酚(由水浴加热融化)20 mL、甘油40 mL、乳酸20 mL、蒸馏水20 mL混合配制而成。 3.8 次氯酸钠。 3.9 酒精。 3.10 琼脂。 4 现场检疫 查验待检货物的有关单证，核实产地、包装、唛头、品名及数量。逐件检查橡胶树繁殖材料的芽条、芽穗、蒴果等是否有可疑疫情，重点应检查 叶片。对于来自疫区的材料，还应仔细检查装载交通工具和包装材料。然后，直接扦取有可疑症状的部位；如果没有发现任何可疑症状，则按5％的 繁殖材料比例扦取样品，带回实验室检查；如果样品数量少于10件，则全部扦取。 5 检验方法 5.1 症状检查 仔细检查橡胶的叶片、枝条、茎杆和蒴果尤其是嫩叶是否有橡胶南美叶疫病感病症状。该病的病斑通常有半透明的榄绿色斑点，暗淡青灰色或发 黑，穿孔。叶片卷曲，畸形，皱缩变黑呈火烧状。病斑的背面灰白色，其上密生绒毛物(即分生孢子梗和分生孢子)，病斑的四周轮生小黑点(即分生 孢子器或子座)。叶柄呈螺旋状扭曲。花序变黑、卷缩。枝条、茎杆坏死。果实上有隆起的褐色病斑。在感病组织上，最常见是散生的分生孢子梗和 其上所产生的分生孢子。 5.2 病原菌检查 用解剖针挑取或刀片刮取病斑上的绒毛状物，制片，在显微镜下直接检查有无病菌的子实体，记录其形态特征，必要时还应测量分生孢子梗和分 μ μ 生孢子的大小。在解剖镜下检查可疑病斑上的小黑点，切取带有病菌子实体的组织，用冰冻切片机或手工将组织切成厚度约为10 m～20 m的薄片，制 片，在显微镜下检查子囊壳和／或分生孢子器，记录形态特征，并测量大小。 5.3 分离培养 如果发现可疑症状，或没有发现该病菌的任何子实体，应采取分离、培养的方法作进一步鉴定。直接刮取病斑上的分生孢子放入HMA培养基(参见 附录A.2)培养，或选择新鲜病组织(