《雌核发育》-公开课件.pptVIP

雌核发育 gynogenesis 人工诱导雌核发育(artificially induced gynogenesis)是指通过用物理或化学方法使遗传失活的精子激活卵,精子不参与合子核的形成,卵仅靠雌核发育形成胚胎的现象。 在二倍体生物中这样的胚胎是单倍体,没有存活能力。通过阻止极体排出或卵裂使其恢复二倍性后,便成为具有存活能力的雌核发育二倍体。近十几年来,人工诱导雌核发育作为快速建立纯合系、克隆的有效手段受到各国学者的极大关注。 人工诱导贝类雌核发育二倍体的方法和原理 贝类雌核发育二倍体人工诱导可以通过两个步骤实现。 精子染色体的遗传失活 目前使贝类精子染色体遗传失活的方法主要是采用辐射处理。 到目前为止,已经被成功使用的辐射处理包括C射线、x射线以及紫外线(ultravoilet,UV)。各种辐射处理各具有优缺点。在人工诱发雌核发育二倍体时,必须解决精子的辐射剂量和处理受精卵的开始时间这两个关键问题。选择一个合适的剂量使精子染色体完全失活而不影响其受精能力,才能得到雌核发育单倍体胚胎。 用UV处理使精子遗传失活因其有效性及便利性被广泛地用于雌核发育的人工诱导。此外,UV还有照射后精核染色体碎片少的优点。其作用机理主要是B精子DNA经紫外线照射后形成胸腺嘧啶二聚体(thymine dimers),使DNA双螺旋的两链间的氢键减弱,从而使DNA结构局部变形,阻碍DNA的正常复制和转录。 卵子染色体的二倍体化 用遗传失活的精子与卵子受精,发育出来的胚胎通常为单倍体。贝类雌核发育单倍体通常表现为胚胎发育速度变 慢,并且一般在D形幼虫前停止发育或死亡。因此,要获得具有生存能力的雌核发育二倍体,除失活精子之外,还必须恢复卵子染色体的二倍性。 诱导原理 海洋贝类排出的成熟卵停留在第一次成熟分裂(MI)的前期或中期[31],只有在受精或经精子激活后卵子才完成MI和第二次成熟分裂(Mò),释放出第一极体(PB1)和第二极体(PB2)。贝类雌核发育二倍体的人工诱导原理就是在第一次或第二次成熟分裂时采用物理或化学方法通过抑制第一和第二极体的排放或第一次卵裂,使得卵核染色体加倍,形成二倍体的卵核,从而发育成为雌核发育二倍体个体。 在诱导贝类雌核发育二倍体的过程中,由于遗传物质完全来源于母体,则雌核发育后代的纯合程度将因二倍化的情况不同,存在以下三种情况: 1)若二倍化是由于阻止了第一极体的形成和排出,则导致2/3甚至几乎100%的杂合后裔; 2)若二倍化是由于阻止第二极体的形成和排出,该雌核发育二倍体的遗传物质是由雌性原核和第二极体的再融合构成的,基因的纯合性较高,但仍有些基因处于杂合状态,杂合程度取决于第一次成熟分裂期间的基因互换频率; 3)若二倍化是阻止第一次卵裂,使本应分属于两个单倍体细胞的染色体重新融合为二倍体,则由此发育起来的二倍体由于不含有第一极体或第二极体的遗传成分,每一对同源染色体中的一条是以另一条为模板如实复制而得到,故所有的基因都处于纯合状态,是理想的纯合体,可直接用于建立纯系。 在后代染色体的纯合程度方面,因三种方法存在着各自的差异,因此将人工诱导雌核发育分为两种类型: 一种是抑制第一、二极体排放,称为减数分裂(?、ò)型雌核发育(Meiotic-G2N)或极体抑制型雌核发育、杂合子雌核发育; 另一种是阻止第一次卵裂(有丝分裂),称为有丝分裂型雌核发育(Mitotic-G2N)或第一次卵裂抑制型雌核发育、纯合子雌核发育。 两者比较,有丝分裂型雌核发育由于通过阻止第一次卵裂,可在当代产生纯合二倍体,下一代如重复雌核发育便形成克隆品系;而减数分裂型雌核发育只做到部分纯合,要经过多代连续雌核发育才有可能建立纯合度较高的品系[34]。因此,有丝分裂型雌核发育比减数分裂型雌核发育的研究价值要大得多,但也困难得多。 诱导方法 目前人工诱发贝类雌核发育二倍体的方法主要有物理方法和化学方法(表1)。物理方法主要采用温度休克处理,化学方法主要是用一些化学诱导剂,如细胞松弛素B (cytochalasin B,CB)、秋水仙素(colchicine)、6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)以及咖啡因(caffeine)。 温度休克: 通常采用高温或低温抑制卵子的