免疫印迹技术.pptxVIP

基本概念;Western Blot基本原理;;Western Blot一般流程;一 蛋白样本制备---成功蛋白分析的基础;3、方法的选择;二 细胞中总蛋白的制备;1、组织或细胞破碎;2、细胞裂解液;Company Logo;2.3 蛋白酶抑制剂及其鸡尾酒 抑制蛋白酶的活性，防止蛋白被水解，使用前临时加入; 2.4 磷酸酶抑制剂选择 抑制磷酸酶的活化，防止蛋白样本脱磷酸化， 使用前临时加入;.;2.7 全蛋白抽提时注意事项;2.8 细胞裂解液-RIPA Buffer的配方分析及技术要点;三 蛋白样本制备产品选择;1、核蛋白样本制备;2、膜蛋白样本制备;3、亚细胞分级抽提;四种亚细胞组分分离提取的结果;5、其它蛋白抽提产品;四 蛋白定量产品选择指南;1、BCA法蛋白定量;2、Bradford法蛋白定量;3、Lowery法蛋白定量;免疫印迹（Western Blot）;五、蛋白质变性;六、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳;2、SDS -蛋白质复合物的特点;3、支持体：聚丙烯酰胺（Acr和Bis）;凝胶成份;4、不连续SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳;在浓缩胶(pH=6.8)中HCl几乎全部解离为Cl-，但只有极少部分甘氨酸解离为H2NCH2COO-。 蛋白质的等电点一般在pH5左右，在此条件下其解离度在HCl和甘氨酸之间。当电泳系