bfgf荧光真核表达载体构建及表达.pdfVIP

维普资讯 796 · oIlgMedicalJ bFGF荧光真核表达载体构建及表达 * 张丽君 王 捷 丁焕文 郭 勇 杨传红 冼 江 郑文岭 广州军区总医院医学实验科 (广州 51OO1O)；华南理工大学食品与生物工程学院(广州 51O64O) 摘【要】 目的 构建可在哺乳细胞中表达碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor，bFGF)的荧光真核 表达载体，以便进一步转染成骨细胞，研究bFGF基因转移在骨组织工程学中的应用。方法 应用基 因重组技术，将 已 经克隆的bFGF基因从 PBR322一bFCF载体上亚克隆到荧光真核表达栽体pEGFP—C3，构建的重组质粒经脂质体介导转 染3T3细胞，36h后观察瞬时表达情况。结果 ①酶切 、PCR和DNA序列鉴定均证 实插入 片段的正确性。②荧光显微 镜下观察GFP的表达情况，观察到部分经转染的细胞发出绿色荧光；免疫组化检测 bFGF的表达分泌情况，结果显示部 分经转染的细胞呈阳性(棕色颗粒)。结论 成功地构建了bFCF荧光真核表达载体 pEGFP—c3一bFCF，并在3T3细胞 中表达了bFGF。 【关键词】 bFGF基因 荧光真核表达载体 转染 ConstnlctionandexpressionofbFGFgenefluorescenteukaryoticcellexpressionvector zho,,g的 ，WangJ／e，D／rigHuan一 n， ． ofMedicalResearch，C,eneralHospitalofGtl~ z,holl,CommandofP ， ∞昌z}n510O10 【Abstl-ad】 Objedive Toconsturctamammalianbasicfibroblastgrowthfactor(bFCF)recombinantvectorforapplicationof bFCFgenetral~erinbonetissueengineering．Methods bFGFgeneWItSsubclonedintopEGFP—C3vectorfrom PBR322vectorby nM删l ofgenec]o,l~gtoobtainpEGFP—C3一bFGFp]a~ a．3T3cellsweretransfectedwithpEGFP～C3一bFCFplasfnidusingLipo— fectamineMT 2OO0reagent ． After36hours，t}letransientexpressionofGFPandbFGFwasmeasured．Results ①Correctconstructionof pEGFP一(23～bFCFwasidentifiedbymethodsofrestrictionenzymeanalysis．PcRamplicadonandnucleotidesequencedetermination． ②GreenfluorescenceWItSernitledfromtransfectedcellstmderfluorescentmicroscope，immtmohistochemistyshowedpartsoftran~ected ceilsexpressedbFGF(brownstai,ling)．Conduslon ThepEGFP一123～bFGFfluorescenteuka~otieexpressionplasmidwascon— struttedsuccessfullyandb FCallbeexpressedjn3T3cells． K【eywords] bFCFgene FluorescenteukaryotieexpressionvectorT~ eetion 1974年 Gospodarowiez等ll首次从牛神经组织纯化到 DNA聚合酶购 自大连宝生物公司；脂质体 LipofectamitieTM 碱性成纤 维细胞 生长因子 (basicfibroblastgrowthfactor． 2OOO购 自Invitrogen公司；提取质粒试剂盒购 自上海博彩 bFCr)，能刺激成纤维细胞生长