临床生物化学检验常用技术.pptxVIP

第三章临床生物化学检验常用技术本章内容概要第一节 光谱分析技术第二节 电化学分析第三节 干化学分析技术第四节 电泳技术第五节 层析技术第六节 离心技术第七节 自动生化分析技术 　教学目标和要求1、掌握分光光度技术的基本原理及定性和定量方法。掌握电化学分析方法基本原理2、熟悉分光光度计的基本结构和操作方法光源检查和波长校正、原子分光光度计的类型和影响荧光分析的因素。熟悉离子选择电极分类，离子选择电极的分析方法 3、了解其他光谱分析技术的基本原理及在生化检验中的应用。第一节 光谱分析技术分光光度技术的基本原理分光光度计的基本结构分光光度计的操作方法 分光光度技术的定性和定量方法 一、光谱分析技术的基本原理： 利用各种化学物质都具有发射、吸收或散射光谱谱系的特征，以此来确定物质性质、结构或含量。1、 光谱分析技术分类：发射光谱分析技术：火焰光度法、原子发射光谱法和荧光光谱法 吸收光谱分析技术：紫外、可见光分光光度法，原子吸收分光光度法和红外光谱法 散射光谱分析技术：比浊法 2、光的基本性质---高速传播的电磁波微粒性(E=hv) 波粒二象性波动性(?=c/v)E=hv =hc/ ?----光的能量与光的波长成反比，与光的频率成正比3、物质对光吸收的基本原理：能量转移 ----当光辐射通过某种物质时，组成该物质的分子（原子）与光子发生“碰撞”，光子的能量因此转移至分子（原子）上，使它们由基态(低能态)跃迁到激发态(高能态)，这种跃迁称为激发。选择吸收 ----组成物质的分子仅吸收与其内能变化(基态与激发态能量差)相对应的波长或频率的光，所得到的光谱称为吸收光谱。?能量释放 ----处于较高能态的分子(激发态分子)不稳定，当其返回基态时，以热或发射光谱的形式将能量释放出来。所发射出的相应光谱，称分子发射光谱。激发态E1发射光谱吸收光谱E0基态E1 ＞E04. 分类 （1）根据产生光谱的物质结构 原子光谱 (atomic spectrum) 分子光谱 (molecular spectrum)（2）根据光谱获得的方式不同① 吸收光谱（Absorption spectrum）分析法： 根据溶液能吸收由光源发出的某些波长的光后所形成的特征光谱来鉴定该物质的性质和含量的方法。 紫外-可见分光光度法 (ultraviolet and visible spectrophotometry) 原子吸收光谱法 (atomic absorption spectrophotometry) 红外光谱法 (infrared spectrometry)② 发射光谱(emission spectrum)分析法： 根据物质受到热能或电能等的激发后所发射出的特征光谱来进行定性及定量分析的一种方法。 原子发射光谱法 (atomic emission photometry) 分子发光分析法 1、定义： 根据被测物质对各种不同波长光的吸收能力，绘制吸收曲线，并根据曲线的特性鉴定物质的方法。 属光谱分析法。 二 分光光度法可见光： 400~700nm,有色物质溶液 紫外光： 200~400nm,无色物质 2、特点： 仪器设备和操作简单 费用少，分析速度快 灵敏度高(10-4~10-7g/mL) 选择性好 精确度和准确度高 3、应用：（1）定性分析 定性鉴定 纯度鉴定 结构分析（2）定量分析（一）光吸收的基本定律 1、定律： 单色光通过吸光溶液后，吸光度与溶液的浓度和厚度之间呈正比关系。 （1）Lambert定律： 说明吸收与溶液液层厚度间的关系入射光透过光入射光透过光I0I1I0I2L1L2L2 ＞ L1 ，I1 ＞ I2 （2）Beer定律： 说明吸收与溶液浓度间的关系 2、表达式： -lgI/Io=-lgT=K?L?C A=- lgT=K?L?C I/Io为透光率(Transmittance, T) A为吸光度(Absorbance) K为吸光系数(absorptivity) L为液层厚度 C为溶液浓度(concentration)摩尔吸光系数ε：当溶液层厚度单位为cm，浓度单位为mol/L时，K即成为摩尔吸光系数（二）分光光度计的基本结构光源单色器样品室检测器显示1. 光源 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500 nm。 紫外区：氢、氘灯。发射185～400 nm的连续光谱。2.单色器 将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。 ①入射狭缝：光源的光由此进入单色器； ②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束； ③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅； ④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光