气溶胶传播病毒-病毒采集的方法比较.pdf

气溶胶传播病毒？病毒采集的方法比较 在上周的上海新型冠状病毒疫情发布会上，有专家提到一个新名词“气溶胶传播”，一时间 引发关注和热议。新冠病毒是否会通过气溶胶传播？目前官方消息称，尚待进一步明确。 什么是气溶胶？简而言之就是指在空气中悬浮的颗粒物，我们熟悉的PM2.5 也是一种气溶 胶。而病毒气溶胶是生物气溶胶的一种。 引 言 本文根据采集经空气传播细菌的经验（Petras 1966，1967；Rotter 和Koller 1974），测试比 较了凝胶过滤器以及撞击采样器和标准撞击器（AGI-30 型）对病毒气溶胶进行采样的有效性。 这些研究有两大目标： ⚫ 制定过滤病毒气溶胶和处理用于采集病毒气溶胶的过滤器的标准方法 ⚫ 测试过滤器是否适合大容量采样 材料和方法 研究采用实验产生的大肠杆菌噬菌体静态气溶胶（在宽湿度范围内具有高稳定性）、T3 大 肠杆菌噬菌体和A/PR/8/34 （H1N1）流感病毒。气溶胶是在温度和相对湿度可调节的50 m3 的实验室中使用具有导液器（粒径≤5 μm）的喷射雾化器制成的。气溶胶使用安装在16711 采集器（Collectron，MD8 airscan 空气采样器之前的型号）架中的12602 凝胶过滤膜过滤。 在高流量下，该装置可与两台并联的真空泵互换使用（目前的Sartorius MD8 airscan 空气采 样器专为高流量设计）。 标准操作程序和采样体积由应用于撞击采集器和AGI-30 撞击器的采样器工作原理确定。 通过琼脂覆盖法（噬斑法）对收集的噬菌体颗粒进行定量测定，使用孵育蛋滴定流感病毒 （Mayr 等人，1974，1977）或通过在腹水肿瘤细胞培养后进行血吸附测试（Adamczyk 等人， 1975）。 结果 一、通过空气过滤和过滤器处理对病毒气溶胶进行取样的标准程序（T1 和流感病毒气溶胶 的结果） 过滤器的0.1-0.4 m/s 入口速度不影响过滤器在每升空气中的感染单位（I.U.）产率。因此， 当采集稳定性未知的病毒时，建议采样时间为1-2min，入口速度为22.5 l/min 或0.3 m/s 。 在此过程中，不受高达85% 的相对湿度影响的过滤器显示99.9 ％或更高的高截留率。 通过在琼脂平板上直接培养凝胶过滤器来确定空气传播细菌数量这一常用方法对病毒气溶 胶是不可行。对于病毒气溶胶，较切实可行的方法是将过滤器溶解于合适的介质中，然后使 用实验室振动器将介质充分混合以分解任何微生物|病毒聚集。 以下程序已证明是有效的。为了溶解过滤器，在200ml 宽颈锥形烧瓶中放入20 ml pH 值为 7.2 的m/15 磷酸盐缓冲液和40 个直径为2.5 mm 的玻璃珠。将烧瓶置于调节至适当速度的 实验室振动器上，在室温下摇动溶液5 分钟。缓冲溶液的体积可以减少到2.5 ml，以便浓缩 感染颗粒。在此过程中，过滤器完全溶解。 二、使用凝胶过滤器、撞击采集器和撞击器根据标准程序比较采样T1 和T3 气溶胶 对于两种噬菌体气溶胶，3 种采集方法的效率顺序为νF> νI-C> νI （图1），这有利于过滤 器。这种差异产生了其有效性的比例。对于T3 气溶胶，νF：νI-C ：νI 为4.02 ：3.76 ：1， 其中过滤器和撞击采集器之间的差异不显著。对于T1 气溶胶，比例为2.04：1,44 ：1 （50 ％ 相对湿度）；各值之间1％的差异具有重要意义。在气溶胶浓度108-105 个噬菌体颗粒/m3 空气的范围内确认了采集效率的顺序，这也是使用标准程序的所有3 种采集方法对噬菌体气 溶胶的下检测限。 图1 AGI-30 撞击器(I)、凝胶过滤器(F)和撞击采集器(I –C)间对T1 和T3 气溶胶采集效率的 比较。 三、用凝胶膜过滤器大体积取样病毒气溶胶 作为检测低病毒颗粒（病毒粒子）浓度的先决条件，大体积量取样在理论上可以通过以下方 式实现： ⚫ 在特定时间内增加流量 ⚫ 延长采样时间 1. 延长采样时间（T1 和甲型流感病毒的结果）： 通过过滤器以0.3 m/s 的入口速度对空气采样15 分钟（相当于337.5 升采样空气），不会导 致采集的病毒粒子失活。该试验的取样程序通过减少缓冲溶液体积以获得更高的病毒粒子| 噬菌体粒子浓度，证明了较低的检测限可以低转换为102 I.U./m3 空气范围（图2 ）这一数 学理论。 图2 用于产生气溶胶的每毫升液体中噬菌体颗粒的浓度与使用凝胶过滤器采集产生的每 升空气中l.U.的数量之间的关系。在相对湿度为50-55%和20℃下的T1 气溶胶。