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层 析;掌握：层析的概念、一般原理 凝胶层析的基本原理 装层析柱的过程及装柱要求 熟悉：层析技术的分类 凝胶层析的特点 凝胶的结构与性质 了解：凝胶的选择 柱、样品、洗脱液的选择 凝胶的保存 ;一.概述 ;色谱历史;1958年，Stein和Moore研制出氨基酸分析仪，确定了核糖核酸的分子结构 1967年，Horvvath和Huber等研制了高效液相色谱(high-performance liquid chromatography,HPLC)仪 1975年，Small等提出离子色谱?? ? 20世纪80年代，超???界色谱 20世纪90年代，毛细管电泳（1809年Re?ss第一次电泳实验） 21世纪，联用技术、大分子色谱分离、制备色谱可望取得更大的发展; 层析法进行时有两个相，一个相称为固定相(Stationary phase )，另一相称为流动相(Mobile phase )。由于各组分所受固定相的阻力和流动相的推力影响不同，各组分移动速度也各异，从而使各组分得到分离。;;二.层析技术的分类 ;层析;2.按层析过程的机制可分为 ?.吸附层析(adsorption chromatography ) ----利用吸附剂对不同组分吸附 能力的不同加以分离的方法。 ?.分配层析(partition chromatography ) ----利用不同组分在流动相和固定相中的 分配系数不同而进行分离的方法。;?.离子交换层析 （ion-exchange chromatography ） ----利用离子交换剂与各组分之间的离子亲和 力不同而进行层析分离的方法。 ?.凝胶层析（gel chromatography） ----利用不同组分之间分子大小不同，在通过凝胶介质时所受到的阻滞作用的差异而进行分离的方法。 ?.亲和层析（affinity chromatography） ----利用生物大分子之间特有亲和力的不同进分离纯化的方法。 ;3.按操作技术形式分类 ?.柱层析（colum chromatography） ----将固定相装在层析柱中，使样品 朝着一个方向移动，通过各组分随流动相流动而得到分离的方法。;?纸层析（paper chrmatography） ----用纸作为液体的载体，样品点在 纸上随后展开达到分离鉴定的 方法。 ?.薄层层析（thin layper chromatography） ----将适当的吸附剂在玻璃板或 其他材料薄板上铺成薄层，样品 点在上面随后用流动相展开达 到分离鉴定的方法。 ;三.层析的一般原理 ;1.分配系数 (Partition chromatography) 混合物在层析过程中不管层析技术采用哪两种状态的相(流动相和固定相)都能达到分配平衡，用来叙述一种物质在两种特定相中的分配程度是用分配系数表示的。 ; 分配系数----是一种物质在两种特定相中分配，在特定的温度时这个系数的值是一个常数，即: 溶质在固定相中的浓度 Cs K= ———————————— = —— 溶质在流动相中的浓度 Cm ;有效分配系数：定义为化合物在一个相的总量除以另一个相中的总量。实际上是分配系数乘以两个相的体积比。 在不同的层析机制中,分配系数K的含义不同,在吸附层析中,K为吸附平衡常数;在分配层析中,K为分配系数;在离子交换层析中K为交换常数.; 分配系数K值大,说明物质在层析中被固定相吸附得比较牢固,随流动相迁移的速度较慢,留在固定相中的时间较长,在洗脱液中后出峰。若分配系数K值小，则该物质在洗脱液中较早出峰。; 从一个混合物中分离和纯化一种生物物质的纯度如何，取决于混合物中各组分K 值的差异程度。 混合物中各组分若 K值相差较大, 则能较易地把混合物中的生物物质分离