乳酸脱氢酶活力测定.pptxVIP

目的要求;原理;LDH可溶于水或稀盐溶液，可制备组织匀浆，经浸泡、离心，得上清为组织提取液。LDH测定方法很多，紫外分光光度法最为简便快速。鉴于NADH和NAD+在340nm和260nm处有各自最大吸收峰值，因此以NAD+为辅酶的各种脱氢酶类都可通过340nm光吸收值的改变，定量测定酶的含量。 本实验反应液中含丙酮酸及NADH，在一定条件下加入一定量酶液，观察NADH在反应过程中340nm处光吸收减少值，减少越多，则LDH活力越高。其活力单位定义为：在25 ℃ ，pH7.5条件下A340nm/min下降为1.0的酶量为1个单位。可定量测定每克湿重组织中LDH单位，定量测定蛋白质含量即可计算比活力（U/mg）。;试剂与器材;操作方法;（一）制备肌肉匀浆;（二）LDH活力测定;（三）蛋白质含量测定;（四）数据处理;注意事项;思考题