《T∕CVMA 10-2018 猪圆环病毒Ⅱ型微滴式数字PCR检测方法》.pdf

ICS 11.220 B 41 团 体 标 准 T/CVMA 10—2018 会 协 猪圆环病毒Ⅱ型微滴式数字PCR 检测方法 Method of Droplet Digital PCR for Detection of Porcine Circovirus Type 2 医A 兽M 国 V 中 C 2018 - 10 - 24 发布 2018 - 10 - 24 实施 中 国 兽 医 协 会 发 布 T/CVMA 10—2018 前 言 本标准按 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中国兽医协会提出并归口。 本标准起草单位：中国动物疫病预防控制中心、山东省动物疫病预防与控制中心。 本标准主要起草人：原霖、辛盛鹏、宋晓晖、王传彬、杨林、陈静、胡冬梅、董浩、张月、李晓霞、 汪葆玥、亢文华、孙圣福、王晓英、徐琦、孙雨、陈亚娜。 会 协 医A 兽M 国 V 中 C I T/CVMA 10—2018 猪圆环病毒Ⅱ型微滴式数字PCR 检测方法 1 范围 本标准规定了猪圆环病毒Ⅱ型(Porcine circovirus type 2，PCV-2)微滴式数字PCR检测方法的试 剂与耗材、仪器与设备、操作步骤、结果分析。 本标准适用于猪圆环病毒Ⅱ型核酸的检测。 2 规范性引用文件 会 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 协 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 原理 医A 微滴式数字PCR （Droplet Digital PCR，ddPCR）的技术原理是利用微滴化技术将一份反应体系分 成数万个纳升级的微滴进行定量PCR检测，本质上是将传统定量PCR的一次检测变成数万次检测，提高了 核酸序列检测的灵敏度和精准度。微滴发生器可以将每一份扩增体系分成数万个均匀的纳升级微滴，每 兽M 个微滴不含或者含有一个至数个待检核酸靶分子。每个微滴都将作为一个独立的PCR扩增体系，在PCR 扩增仪上进行终点PCR扩增。利用微滴分析仪对每个微滴进行检测，有荧光信号的微滴判读为1，没有荧 V 光信号的微滴判读为0。然后根据泊松分布原理以及阳性微滴的比例，计算出待检靶分子的浓度或拷贝 数。 国C 4 试剂与耗材 中 4.1 提取 宜选取商品化的病毒DNA提取试剂盒。 4.2 微滴式数字PCR 扩增试剂 宜按照不同的微滴式数字PCR平台的说明书选取推荐的微滴式数字PCR扩增试剂。