血红蛋白与核黄素凝胶层析分离电液 黎振威 .pptVIP

血红蛋白与核黄素的凝胶层析分离电液;血红蛋白与核黄素;实验目的;层析技术;凝胶层析;实验原理;实验器材与试剂;实验操作;柱层析示意图3）装柱 将处理好的凝胶在烧杯内用1倍提及的洗脱液搅拌成悬浮液，自柱顶部沿管内壁缓缓加入柱中。待底部凝胶沉积至5cm左右时，缓缓打开低端出口管，随之继续缓慢添加凝胶悬浮液直至凝胶体积沉积至25cm高度为止。操作中注意防止气泡与节痕产生。;（4）平衡 装好后，使层析床稳定5~10min,然后接上高位贮液瓶，打开出口活塞，调节高位贮液瓶的高度，控制流速为1ml/min。用2倍于床体积的洗脱液进行平衡，使层析床稳定. 操作过程中应特别注意：①在平衡与洗脱时要将高位贮液瓶至层析柱的连接管内的气泡全部排出，以免影响流速；②恒压高位贮液瓶内玻璃管底端出口高度之差不能大于40cm，以免影响流速；③平衡过程中务必防止层析床液体流干。防止层析床液体流干最简单的方法是使连接高位贮液瓶与层析柱之间的导管形成U形，U形管底部低于层析柱的出口；④如果需要温度平衡，可同时在层析柱夹套内通入恒温水。; （5）加样与洗脱。 打开平衡好的层析柱低端出口，使柱内溶液流向与床表面相切时关闭出口。将吸有0.5ml样品的加样滴灌在床表面上1mm处沿管内壁轻轻转动加样，加完后，打开底端出口使样品流至床表面，关闭出口，用少量洗脱液同样小心清洗管内壁1~2次，使样品流至床表